□ 付范尼 AB SCIEX臺北(臺灣)

　　安德烈·帥博 AB SCIEX 康科特,安大略(加拿大)

　　近來摻雜高含氮組份偽造高蛋白含量假象的事件，促使食品制造商和監(jiān)管部門使用快速而準確的分析方法提前確定產(chǎn)品安全性。早在2007年，面筋粉中的三聚氰胺和三聚氰酸就導致了腎衰竭等病癥的發(fā)生，引起大量貓狗死亡。2008年，中國檢測部門在數(shù)種牛奶和嬰兒配方奶粉中發(fā)現(xiàn)了三聚氰胺。這導致了成百上千的受害者及6例死亡案例，同時相關(guān)產(chǎn)品也在很多國家進行了召回。

　　為了應(yīng)對三聚氰胺的污染，大量針對三聚氰胺及其同系物的檢測方法被開發(fā)出來，其中包括美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)開發(fā)的針對三聚氰酸的一些方法。

　　無論如何，凱氏定氮法，這種通過測定食品中氮元素含量，間接衡量蛋白質(zhì)含量的傳統(tǒng)方法，依然是最為常用的。只要食品中蛋白質(zhì)的含量仍然不是直接進行測量的，唯利是圖的使用含氮量高的化合物進行摻假就依舊是一個嚴重的問題。

　　檢測潛在摻假物(非蛋白氮源)，包括脒基脲，氰尿二氰尿酰胺、三聚氰酸、縮二脲、環(huán)丙三氨三嗪、滅蠅胺、雙氰胺、三聚氰胺、三脲、尿素的方法已經(jīng)被開發(fā)并驗證，用以檢測奶制品和蛋白樣品。

　　我們發(fā)布一種快速、簡單、靈敏的液質(zhì)質(zhì)方法，用以檢測牛奶和其他高蛋白食品中，μg/kg級的雙氰胺以及其他的高氮量化合物。

　　實驗

　　樣品處理

　　樣品提取液按照以下步驟處理：

　　1g均值樣品中加入10mL含有2%甲酸的乙腈;

　　充分混合，超聲10分鐘;離心10分鐘;

　　轉(zhuǎn)移50μL提取物至進樣瓶，并加入950μL稀釋200倍。

　　針對嚴重污染的食品，可能會進行進一步的提取和稀釋。

　　液相

　　使用親水作用色譜柱(HILIC)和一般色譜條件對目標物進行分離。液相分離使用Eksigent ekspertTM ultraLC 100系統(tǒng)，和Phenomenex LUNA HILIC 3μ(100×2mm)色譜柱。流動相含0.1%的甲酸和10mM甲酸銨，流速為0.2mL/min(見表1)。進樣體積10μL。

　　質(zhì)譜

　　AB SCIEX帶有Turbo VTM離子源的QTRAP® 5500質(zhì)譜。質(zhì)譜使用快速正負切換的多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式。選擇兩對離子，利用定性定量離子比率進行確證(見表2)。使用13C315N3-三聚氰胺為內(nèi)標。液質(zhì)質(zhì)數(shù)據(jù)采用MultiQuantTM2.1軟件進行處理。

　　結(jié)果及討論

　　首先，通過雙氰胺標準及基質(zhì)添加，驗證最低檢出限(LOD)和重現(xiàn)性。圖1展示了牛奶中2μg/kg的雙氰胺色譜圖，定量離子流信噪比(S/N)為54，定性離子為13。圖2展示了牛奶中雙氰胺添加的回收曲線(經(jīng)過200倍稀釋)。建議使用更高的稀釋倍數(shù)，以減少單一內(nèi)標難以校正的基質(zhì)效應(yīng)。

　　兩對離子的回歸系數(shù)均可達到或超過0.997。MRM離子豐度全部都在0.392的25%的范圍之內(nèi)。離子比率可以直接使用MultiQuantTM軟件的自動計算并報告。

　　其次，本方法同樣可以擴展到其他潛在污染物，如圖3所示。雙氰胺(保留時間，RT=2.0min)，三聚氰胺(RT=4.6min)，氰尿二酰胺(RT=4.7min)，氰尿酰胺(RT=4.8min)使用正離子模式和三聚氰酸(RT=2.1min)使用負離子模式。使用QTRAP® 5500快速正負切換可以實現(xiàn)一針進樣同時檢測雙氰胺和三聚氰酸。

　　圖4展示了三聚氰胺(正離子)和三聚氰酸(負離子)的標曲。所有的標曲的回歸系數(shù)R均大于0.998。

　　值得注意的是，三聚氰酸的的添加曲線(<10μg/kg)并未過原點。

　　使用已開發(fā)的方法和正離子模式，檢測牛奶樣品的雙氰胺。使用批處理軟件，自動定量并進行離子比率確認。

　　總結(jié)

　　本文的數(shù)據(jù)展示了一種使用液質(zhì)質(zhì)，快速、簡便和精準的檢測牛奶和其他高蛋白食品中，雙氰胺和其他高氮量化合物的方法。AB SCIEX QTRAP® 5500系統(tǒng)提供了一個非常靈敏和高選擇性的方法，而且僅需少量的樣品前處理，節(jié)省時間從而最大化通量。

　　雙氰胺等化合物的檢測，可以使用MultiQuantTM軟件進行自動計算、鑒定并報告。