2013年1月，享譽(yù)全球的新西蘭牛奶及奶制品被檢測(cè)出含有低含量的有毒物質(zhì)二氰二氨，新西蘭政府已經(jīng)下令禁售含有二氰二氨的奶類產(chǎn)品;新西蘭農(nóng)民普遍會(huì)在牧場(chǎng)使用二氰二氨，其目的是防止硝酸鹽等對(duì)人體有害的肥料副產(chǎn)品流入河流或湖泊。新西蘭兩大肥料公司已經(jīng)停止出售并召回二氰二氨產(chǎn)品，直至政府查出殘留二氰二氨的來(lái)源;美國(guó)食品和藥物管理局將雙氰胺添加到安全性待檢測(cè)物質(zhì)名單,雖然國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)食品中的雙氰胺限量，但高劑量的雙氰胺對(duì)人體是有毒的。

　　二氰二氨(俗稱雙氰胺)，縮寫DICY或DCD，是氰胺的二聚體，也是胍的氰基衍生物?；瘜W(xué)式C2H4N4，白色結(jié)晶粉末，可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺，幾乎不溶于醚和苯，不可燃，干燥時(shí)穩(wěn)定。在分析過(guò)程中存在著很大困難，雙氰胺極性非常大，傳統(tǒng)C18色譜柱及HILIC色譜柱均難以保留，對(duì)于復(fù)雜的奶制品基質(zhì)來(lái)說(shuō)會(huì)與雜質(zhì)共流出，影響分析目標(biāo)化合物的定量和定性。

　　實(shí)驗(yàn)方法

　　樣品前處理方法

　　取1g奶粉加2mL水溶解，劇烈震搖60s并超聲5min至完全溶解，然后加乙腈定容至10mL混勻，并沉淀蛋白，9000轉(zhuǎn)高速離心10min;取2mL上清液到100mg QuEChERs凈化管，震搖1min,取1.5mL凈化管中上清液用9000轉(zhuǎn)高速離心5min，離心后，上清液經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾后直接上樣分析。

　　儀器方法

　　UPLC-TQD方法

　　儀器：ACQUITY UPLC-TQD系統(tǒng);

　　流動(dòng)相A：10mmol/L乙酸銨;

　　流動(dòng)相B：乙腈;

　　色譜柱：ACQUITY UPLC® BEH HILIC 1.7μmx2.1mmx50mm;

　　流速：0.2mL/min;

　　柱溫：30℃;

　　進(jìn)樣體積：2μL。

　　梯度曲線(見表1)

　　MS參數(shù)(見表2)

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

　　雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線(配置0.05ppb,1ppb,5ppb,10ppb,20ppb,50ppb濃度雙氰胺加奶粉基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)點(diǎn)重復(fù)進(jìn)樣3針，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果獲得如下標(biāo)準(zhǔn)曲線)。

　　本實(shí)驗(yàn)在未添加同位素內(nèi)標(biāo)的情況下，空白基質(zhì)添加50ppb樣品濃度，測(cè)得雙氰胺平均回收率為88%。

　　結(jié)論

　　本文采用沃特世超高效液相色譜UPLC®與高靈敏度三重四極桿Xevo TQD，開發(fā)了分析奶粉中雙氰胺的檢測(cè)方法，此方法建立在HILIC機(jī)理的BEH色譜柱上。對(duì)基質(zhì)中添加50ppb的待測(cè)物，經(jīng)過(guò)QuEChERs凈化后進(jìn)樣，不但峰形良好、不受基質(zhì)干擾影響，靈敏度也完全滿足檢測(cè)要求。為了達(dá)到快速、高效的分析目的，本文采用QuEChERs凈化管，樣品經(jīng)簡(jiǎn)單的蛋白沉淀后加入到QuEChERs凈化管中凈化，之后直接進(jìn)樣即可，無(wú)需揮干復(fù)溶。方法簡(jiǎn)單、快速，尤其對(duì)于大批量樣品的檢測(cè)，該方法可以大大提高分析效率。

　　在LCMSMS方法開發(fā)中，雜化顆粒的HILIC模式色譜柱起到了很大作用，首先待測(cè)物均為極性化合物，反相色譜無(wú)法保留，HILIC提供了一個(gè)互補(bǔ)的選擇。其次在眾多HILIC模式色譜柱中，BEH色譜柱為雜化顆粒技術(shù)，pH耐受范圍廣(pH1～10)，為方法開發(fā)提供了更大的空間，且BEH在此應(yīng)用中具有更好的選擇性和峰形。