?水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定方法
□ 侯冰 林威 宋文 宋之光 金楓清 丹東市檢驗(yàn)檢測認(rèn)證中心
1 材料與方法
1.1 試劑與儀器
提取液、快速衍生試劑:廣州潤坤生物科技有限公司;AOZ:100μg/mL,農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所;AHD、SEM:純度≥99.0%,Dr.Ehrenstorfer;AMOZ、D4-AOZ、D5-AMOZ、13C3-AHD、13C-15N-SEM:純度≥98.0%,WITEGA。
XEVO TQD液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:美國Waters公司;ME2002電子天平:瑞士梅特勒-托利多公司。
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 樣品的前處理
1.2.1.1 水解和衍生化
稱取試樣2g(精確至0.01g),加入混合內(nèi)標(biāo)溶液100μL,加入1mL水震蕩3min,加入1mL提取液,震蕩混合1min,在4000r/min下離心5min。倒出上清液,加入100μL快速衍生試劑,置于55~60℃的恒溫水浴鍋中衍生60min。
1.2.1.2提取和凈化
取出水解和衍生化樣液冷卻至室溫,加入5mL 0.1mol/L的磷酸氫二鉀,并用1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.4,混勻。用8000r/min離心10min,以小于2mL/min的流速過PEP-2小柱(規(guī)格為60mg/3mL,用5mL甲醇、5mL水活化),并用10mL的水洗滌固相萃取小柱,負(fù)壓抽干柱子15min。用5mL乙酸乙酯洗脫,60℃下氮?dú)獯蹈?。用流?dòng)相定容至1mL,上機(jī)分析。
1.2.2儀器條件
1.2.2.1色譜條件
色譜柱:C18色譜柱(2.1×50mm,1.7μm);流動(dòng)相:A為0.1%甲酸的水溶液,B為乙腈;流速:0.45mL/min;柱溫:40℃;進(jìn)樣量:10μL;梯度洗脫程序:0~0.2min,A為90%,B為10%;0.2~3min,A為10%,B為90%;3~5min,A為10%,B為90%;5~7min,A為90%,B為10%。
1.2.2.2質(zhì)譜條件
毛細(xì)管電壓:2.6kV;離子源溫度:150℃;去溶劑溫度:350℃;離子源:電噴霧離子源(ESI),正離子模式,多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)。
2 結(jié)果與討論
2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線
配制適當(dāng)濃度的硝基呋喃代謝物標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,除不加樣品外,余下操作同樣品前處理步驟。結(jié)果顯示,各曲線線性關(guān)系良好(相關(guān)性系數(shù)>0.99)。以該4種物質(zhì)在儀器上的信噪比S/N=3作為方法檢出限,4種硝基呋喃類代謝物的標(biāo)準(zhǔn)曲線見表1。
2.2 回收率試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)
取陰性三文魚樣本進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn),加標(biāo)量為0.5μg/kg,平行測試3個(gè)樣本(n=3),回收率試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)結(jié)果見表2。結(jié)果表明,本方法準(zhǔn)確度較高,4種硝基呋喃類代謝物的加標(biāo)回收率在90%~105%之間,重復(fù)性較好(RSD<5%)。
3 研究結(jié)論
水產(chǎn)品用提取液提取,快速衍生化試劑衍生,經(jīng)固相萃取小柱凈化后,分析物采用液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀測定,內(nèi)標(biāo)法定量。4種硝基呋喃代謝物工作曲線線性關(guān)系良好(R2>0.99);方法的檢出限均為0.5μg/kg;方法測定準(zhǔn)確度較高,加標(biāo)回收率在90%~105%之間,重復(fù)性較好(RSD<5%)。
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