應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因食品檢測的PCR技術(shù)及其進(jìn)展研究

2018-11-27 15:48:46 來源：食品安全導(dǎo)刊

評(píng)論0條我來說兩句

　　近幾年，我國轉(zhuǎn)基因食品在隨著社會(huì)發(fā)展的過程中也在不斷的發(fā)展，其中食品檢測的PCR技術(shù)也在快速的發(fā)展當(dāng)中。轉(zhuǎn)基因食品檢測是通過蛋白質(zhì)和外源DNA兩種有效的生物大分子進(jìn)行著手，通過PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）和ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）以及生物芯片技術(shù)。對目前常用的PCR技術(shù)進(jìn)行分析和探究能夠發(fā)現(xiàn)其中的優(yōu)缺點(diǎn)。在現(xiàn)階段的轉(zhuǎn)基因食品檢測環(huán)節(jié)合理的適用檢測技術(shù)能夠?qū)ψ罱K的檢測效果精準(zhǔn)性有很重大的現(xiàn)實(shí)意義。

　　PCR檢測技術(shù)

　　PCR檢測技術(shù)又稱為“聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)”。該技術(shù)能夠完成在體外實(shí)現(xiàn)指定基因和DNA序列進(jìn)行迅速的擴(kuò)增，此技術(shù)最早應(yīng)用在基因克隆和檢測轉(zhuǎn)基因環(huán)節(jié)中，以其精準(zhǔn)和微量的特性，一直被研究學(xué)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用?，F(xiàn)階段，隨著社會(huì)的不斷發(fā)展以及科技的不斷進(jìn)步，人們對食物微生物遺傳性質(zhì)也在不斷深入和了解，認(rèn)識(shí)和掌握了大部分的致病菌其遺傳的基本條件，PCR技術(shù)逐漸被人們所關(guān)注并且給予了高度的重視，將其應(yīng)用在轉(zhuǎn)基因視頻檢測過程中。現(xiàn)階段,轉(zhuǎn)基因食品檢測的PCR技術(shù)主要是用于檢測食品當(dāng)中的成分類別、有益成分、致病菌以及我們的轉(zhuǎn)基因食品，例如大豆、玉米、番茄等。然而傳統(tǒng)時(shí)期的PCR技術(shù)隨著社會(huì)的發(fā)展會(huì)在使用的過程中出現(xiàn)一定的缺點(diǎn)或者是短板，例如當(dāng)食品中有細(xì)菌體存在的時(shí)候，該技術(shù)會(huì)因?yàn)榧訇栃袁F(xiàn)或者是致毒微生物所產(chǎn)生的病毒并不會(huì)被完全的檢測發(fā)現(xiàn)等。

　　轉(zhuǎn)基因食品檢測的PCR技術(shù)改進(jìn)發(fā)展

　　實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)實(shí)質(zhì)上是指將熒光基團(tuán)加入到PCR整體反應(yīng)系統(tǒng)中，利用對熒光信號(hào)的積累，實(shí)現(xiàn)整個(gè)PCR過程中的實(shí)時(shí)檢測，最終通過非常標(biāo)準(zhǔn)的曲線進(jìn)行未知模板的定量。該技術(shù)是通過封閉的環(huán)境下實(shí)施檢測工作的，通過該技術(shù)能夠使熒光激光的光源處平穩(wěn)同時(shí)不會(huì)產(chǎn)生太多的干擾，通過PCR技術(shù)能夠不需要再度進(jìn)行處理，能夠最大化的降低交叉感染的機(jī)率；該技術(shù)在未來的食品檢測過程中能夠縮短整體檢測周期的同時(shí)能夠降低操作難度，能夠?qū)崿F(xiàn)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性以及特異性。該技術(shù)的不斷發(fā)展和進(jìn)步能夠?qū)D(zhuǎn)基因食品加工時(shí)檢測外源DNA受到污染的及時(shí)定量，同時(shí)能夠檢測病原微生物、檢測出食品中摻假量和轉(zhuǎn)基因食品檢測等多方面都起到良好的促進(jìn)性作用。

　　多重PCR技術(shù)多重PCR技術(shù)又稱之為“復(fù)合PCR”，是通過單一形式的PCR技術(shù)作為基礎(chǔ)進(jìn)行改善得到的一種延展性技術(shù)，通過將多條引物和多條模板進(jìn)行混合再加入到一個(gè)綜合性的反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)，將傳統(tǒng)單一的DNA模板加入到同一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)，實(shí)現(xiàn)對相同的模板進(jìn)行不同片段的擴(kuò)增性處理，用該技術(shù)實(shí)現(xiàn)超長片段的擴(kuò)增?，F(xiàn)階段，食品中轉(zhuǎn)基因成分檢測最困難的挑戰(zhàn)便是對于轉(zhuǎn)基因生物數(shù)量進(jìn)行的激增過程。目前唯有美國實(shí)現(xiàn)了大量轉(zhuǎn)基因作物品種的生產(chǎn)。若想從根本解決這一問題，就要在一定的條件下應(yīng)用多重PCR技術(shù)，其基本原理看似簡單，但能夠找到合適的擴(kuò)增條件卻是在多重PCR技術(shù)中最為關(guān)鍵且存在一定困難性的。將多重PCR技術(shù)和傳統(tǒng)的PCR技術(shù)進(jìn)行比較可以看出，多重PCR技術(shù)更加系統(tǒng)化并且較傳統(tǒng)PCR技術(shù)簡單便捷。

　　PCR-DGGE技術(shù)PCR-DGGE技術(shù)是實(shí)現(xiàn)將變性梯度凝膠電泳技術(shù)和傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相結(jié)合的一種新型技術(shù)。PCR-DGGE技術(shù)能夠?qū)蓚€(gè)或者多個(gè)相同長度不同堿基的DNA片段進(jìn)行混合物的分離。通過變性條件允許的情況下，將二者關(guān)聯(lián)在一起，PCR-DGGE技術(shù)就能夠?qū)α硪环N堿基進(jìn)行辨別，該技術(shù)的特異性和敏感性超強(qiáng)。通過成像體系對凝膠染色后進(jìn)行進(jìn)一步的分析。能夠在一定的程度和基礎(chǔ)上顯示出整體樣品的復(fù)雜繁瑣性。同時(shí)，實(shí)現(xiàn)整體樣品中存在的不同生物組通過不同的條帶數(shù)量準(zhǔn)確的反應(yīng)出來，條帶的亮度便是微生物的數(shù)量。PCR-DGGE技術(shù)所含有的自身優(yōu)點(diǎn)和特異性能夠?yàn)槲磥磙D(zhuǎn)基因食品檢測帶來非常重大的改變及影響。

　　轉(zhuǎn)基因食品的多重PCR檢測多重PCR檢測，又被稱為復(fù)合PCR檢測。多重PCR檢測是在同一PCR反應(yīng)體系里加上二對以上引物，同時(shí)擴(kuò)增出多個(gè)把序列的PCR反應(yīng)。在對其反應(yīng)原理進(jìn)行分析時(shí)，可以對一般PCR進(jìn)行查看，將一般PCR作為參考依據(jù)。在對轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行檢測時(shí)，面臨的最大挑戰(zhàn)就是轉(zhuǎn)基因生物數(shù)量不斷增多。FDA公布了一個(gè)資料，美國經(jīng)過批準(zhǔn)投入生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因作物品種已經(jīng)超過了五十個(gè)，這五十多個(gè)轉(zhuǎn)基因作物品種被投入到商業(yè)化生產(chǎn)之中。當(dāng)前國內(nèi)外的很多實(shí)驗(yàn)室都在研發(fā)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測技術(shù)，在尋找同時(shí)檢測多個(gè)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的有效路徑。MPCR檢測技術(shù)的應(yīng)用比較普遍，但是其使用難度比較大，需要尋找合適的擴(kuò)增條件。就目前來看，MPCR技術(shù)被廣泛應(yīng)用在多種轉(zhuǎn)基因作物的檢測之中，定量檢測和定性檢測效果都比較好。近年來超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)也被應(yīng)用在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測之中，同樣收獲了事半功倍的檢測效果。與MPCR技術(shù)相比，超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)具有一定的優(yōu)勢：一方面，超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)只需要一對引物就可以完成對多個(gè)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測。另一方面，超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)可以避免引物之間的干擾問題，提高轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測效率。因此在對轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行檢測時(shí)，應(yīng)該綜合分析現(xiàn)實(shí)情況，采用適宜的檢測技術(shù)。

　　近年來，隨著我國經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展和變化，國家對食品安全問題越來越重視。PCR技術(shù)在我國轉(zhuǎn)基因食品的檢測中體現(xiàn)了極高的優(yōu)勢，隨著市場中出現(xiàn)大量的轉(zhuǎn)基因食品，對轉(zhuǎn)基因食品檢測的精準(zhǔn)性和實(shí)效性的基礎(chǔ)上又提出了新的要求和標(biāo)準(zhǔn)。為了順應(yīng)市場發(fā)展合理的對轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行監(jiān)控，尋求新型便捷、靈敏、精準(zhǔn)、高通量的食品檢測技術(shù)將成為新的發(fā)展趨勢和方向。

　　賀鵬馬靜

　　包頭市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心