摘要:目的:通過HPLC法對食品添加劑苯甲酸、山梨酸的檢驗(yàn),探討二極管陣列檢測器在食品營養(yǎng)學(xué)中的應(yīng)用范圍。方法:采用Agilent C18(150*4.6mm,5µm)色譜柱,用SPD-M20A二極管陣列檢測器檢驗(yàn),檢測波長:230nm。以甲醇-乙酸銨溶液(5:95)為流動相,柱溫25.0℃,流速1.00mL/min。結(jié)果:疑似峰為苯甲酸峰,且在225nm處有最大吸收。結(jié)論:二極管陣列檢測器能夠準(zhǔn)確甄別目標(biāo)峰,在食品檢驗(yàn)領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
關(guān)鍵詞:食品檢測;二極管陣列檢測器;苯甲酸;甄別
適量的食品添加劑為防腐或者加工工藝所需,并且還能夠賦予食品色、香、味。超量使用食品添加劑會損害消費(fèi)者的身體機(jī)能,合理膳食不但要關(guān)注營養(yǎng)組成,更要關(guān)注食品中的添加劑是否過量。大多數(shù)食品成分復(fù)雜,待檢物質(zhì)為微量甚至痕量,如果在食品前處理過程中處理不當(dāng),極易造成分析過程中,雜質(zhì)成分對待測物質(zhì)的干擾。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法,運(yùn)用二極管陣列檢測器對疑似出現(xiàn)的苯甲酸峰進(jìn)行了確定,對熟肉中可能含有的食品添加劑苯甲酸、山梨酸兩種成分同時進(jìn)行含量測定。
儀器與試藥
儀器LC-20AT型高效液相色譜儀(日本島津,包括SPD-M20A檢測器,LCSolution工作站);KT-250W型超聲波清洗器(濟(jì)寧科特超聲電子有限責(zé)任公司);AB104-N型電子天平(梅特勒--托尼多儀器(上海)有限公司);TG16-WS型高速臺式離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)
試藥苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(GBW(E)100006,批號:11003,1.00mg/mL)和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(GBW(E)100007,批號:12001,1.00mg/mL)均購自中國計(jì)量科學(xué)研究院;甲醇(色譜純);水(超純水);其余均為分析純。
方法與結(jié)果
色譜條件色譜柱:Agilent C18柱,150*4.6mm,5µm;流動相:甲醇-乙酸銨溶液(5:95);柱溫:25.0℃;流速:1.00mL/min;檢測波長:230nm。
對照品溶液的制備分別取苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,用水將其稀釋成苯甲酸、山梨酸含量分別為0.00mg/mL、0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.08 mg/mL、0.16mg/mL、0.32mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。
樣品溶液的制備稱取粉碎均勻樣品(鹵豬耳,本地餐館)于小燒杯中,用20mL水分?jǐn)?shù)次清洗小燒杯,將樣品移入25mL容量瓶中,超聲振蕩提取10min,取出后加2mL亞鐵氰化鉀溶液,搖勻,再加入2mL乙酸鋅溶液,搖勻,用水定容至刻度。移入離心管中,4000r/min離心5min,吸出上清液,用微孔濾膜(0.45µm,水相)過濾,即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合使用液精密進(jìn)樣10µL,分別以苯甲酸和山梨酸濃度為橫坐標(biāo),以響應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo),計(jì)算得苯甲酸線性回歸方程:Y=4749431303.52X(R2=1),山梨酸線性回歸方程:Y=7081586158.65X(R2=1)。范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。0.02mg/mL濃度色譜圖見圖1。
圖1 標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖
精密度試驗(yàn)將0.02mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣5次,每次10µL,測定,結(jié)果苯甲酸峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.28%,山梨酸峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.36%,表明儀器精密度良好。
最低檢出限將0.02mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋后測定,在信噪比為3時測得苯甲酸檢出限為2ng。
目標(biāo)峰的確定分別取供試液及0.02mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)樣10µL,用二極管陣列檢測器進(jìn)行全波段掃描,掃描結(jié)果見圖2。
圖2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液掃描圖譜
樣品的含量測定精密稱取樣品2份,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試液,每份供試液分別進(jìn)樣2次,進(jìn)樣10µL,將數(shù)據(jù)代入相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線,測定結(jié)果見表1,分析圖譜見圖4。
表1 熟肉中苯甲酸、山梨酸的含量測定結(jié)果
圖4 供試液HPLC色譜圖
討論
超聲提取時間的優(yōu)化本實(shí)驗(yàn)對超聲的時間進(jìn)行了優(yōu)選,試驗(yàn)中對樣品超聲處理5、10、15分鐘的提取效果進(jìn)行了考察,結(jié)果超聲5分鐘提取不完全,而超聲10分鐘和15分鐘結(jié)果相差不大,因此在樣品前處理過程中,超聲處理10分鐘最佳。
目標(biāo)物質(zhì)的甄別食品檢驗(yàn)過程中,在定位峰的保留時間附近,經(jīng)常會出現(xiàn)其它的峰,難以判定究竟是雜質(zhì)峰還是待測物質(zhì)峰。試驗(yàn)中通過標(biāo)準(zhǔn)溶液定位可知苯甲酸保留時間5.527min,而供試品溶液在5.573min有峰出現(xiàn),鑒于保留時間有細(xì)微差別,難以通過HPLC色譜圖確定待測物質(zhì)是否存在。本試驗(yàn)運(yùn)用二極管陣列檢測器的全波段掃描功能,在180nm至800nm范圍內(nèi),分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液5.527min出峰物質(zhì)和供試品溶液5.573min出峰物質(zhì)進(jìn)行掃描,結(jié)果顯示兩者在波段范圍內(nèi)吸收趨勢一致,并且均在225nm處有最大吸收,表明兩者同為苯甲酸。
檢測波長的選擇國家標(biāo)準(zhǔn)(食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分㈠)推薦苯甲酸的檢測波長為230nm。通過二極管陣列全波段掃描發(fā)現(xiàn),苯甲酸在225nm處有最大吸收,食品檢驗(yàn)過程中,是否應(yīng)該根據(jù)實(shí)際情況選擇最佳吸收波長進(jìn)行檢測,尚需更深入的研究。
參考文獻(xiàn)
[1]中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分㈠[S].2012年版.253-254
呂文超李佳文
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