顯色培養(yǎng)基在檢測食品中沙門氏菌的應(yīng)用研究

2021-05-24 10:26:46 來源：食品安全導(dǎo)刊

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　　顯色培養(yǎng)基在檢測食品中沙門氏菌的應(yīng)用研究

　　本文通過對顯色培養(yǎng)基沙門氏菌檢測方法進(jìn)行研究，通過相關(guān)實踐檢測分析和對比，沙門氏菌是影響食品公共衛(wèi)生安全的重要因素之一。

　　隨著這些年的發(fā)展，顯色培養(yǎng)基成為當(dāng)前一種新型的食品沙門氏菌培養(yǎng)基。在以往培養(yǎng)基的基礎(chǔ)之上，增加了一種新型的具有組合式的特異發(fā)色性酶底物，一旦特異酶在細(xì)菌發(fā)酵過程中顯現(xiàn)出特異性的發(fā)色底物以后，那么當(dāng)目標(biāo)菌落呈現(xiàn)出不同顏色，此時就能對目標(biāo)菌落進(jìn)行有效的鑒別和分離措施，也可以通過計數(shù)的方式進(jìn)行。

　　其中沙門氏菌有一種非常重要的性質(zhì)就是食源性。目前，沙門氏菌在進(jìn)行檢測時依舊沿用傳統(tǒng)生化的方式進(jìn)行，這個過程包括了分離培養(yǎng)、增菌、生化鑒定、血清鑒定等多個步驟。這樣的方式所需要的時間久，通常是需要一周的時間，并且操作的難度大，準(zhǔn)確度低。為此，這些年以來沙門氏菌顯色培養(yǎng)基由于其操作簡單、具有很強(qiáng)的選擇性、所需要的時間較短，從而被全面推廣。這與其他顯色培養(yǎng)基相比較而言，更能被人們所接受。通過總結(jié)這些年顯色培養(yǎng)基在進(jìn)行沙門氏菌檢測時，結(jié)合技術(shù)人員所培養(yǎng)得出的成果，從而獲得以下經(jīng)驗：

　　培養(yǎng)基的菌落種類

　　進(jìn)口類沙門氏菌顯色培養(yǎng)基對于市面上常見的幾種進(jìn)口沙門氏菌可以有以下幾種：美國BD、法國AES、法國科馬嘉、英國OXOID等品種，它們的共同特點是菌落小、沙門氏菌所實驗的菌落顏色對比十分明顯。進(jìn)口沙門氏菌在進(jìn)行顯色培養(yǎng)基過程中使用最為廣泛的屬法國 CHROMagar 顯色培養(yǎng)基，所呈現(xiàn)出顏色則為紫色[1]。

　　國產(chǎn)類的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基沙門氏菌培養(yǎng)顯色培養(yǎng)基在使用過程中較為簡便，從而降低了檢測的整體工作量。我國許多培養(yǎng)基都是靠自主研發(fā)，當(dāng)前，國產(chǎn)類的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基在使用過程中主要有以下三種銷售量最多：廣東環(huán)凱、北京陸橋以及青島海博。其中北京陸橋的通過顏色可以判斷出這跟法國科馬嘉的顯色培養(yǎng)基的效果是相同的；對于沙門氏菌會呈現(xiàn)出紫紅色，那么不是沙門氏菌則呈現(xiàn)出藍(lán)綠色或者是沒有顏色。在2009年廣東環(huán)凱沙門氏菌顯色培養(yǎng)基獲得了全國的發(fā)明銀獎，對沙門氏菌其顏色則呈現(xiàn)出粉紅色，如果是大腸桿菌或是大腸菌落則呈現(xiàn)出顯藍(lán)色，枸櫞酸桿菌則會呈現(xiàn)出紫色，對于其他菌落顯無色或者黃色。

　　沙門氏菌培養(yǎng)基應(yīng)用研究

　　從1974年開始法國 CHROMagar 公司便開始進(jìn)行顯色培養(yǎng)基的相關(guān)研究，為此，從2000年開始沙門氏菌顯色培養(yǎng)基就開始投入使用，對于所研究可以從兩大方面進(jìn)行分析：其一，沙門氏菌顯色培養(yǎng)基跟以往的選擇性的培養(yǎng)基進(jìn)行比較，可以發(fā)現(xiàn)沙門氏菌培養(yǎng)基可以全面取代以往的選擇性的培養(yǎng)基；其二，是屬于國產(chǎn)類的沙門氏菌培養(yǎng)基與國外的沙門氏菌培養(yǎng)基對比實驗。

　　培養(yǎng)基及試劑沙門氏、志賀氏、腸道菌、GN增液菌、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）、瓊脂（SS、HE）。北京陸橋生物技術(shù)有限責(zé)任公司所制定出培養(yǎng)基試劑：腸道綜合雙糖管以及對腸桿菌科鑒定進(jìn)行編碼。沙門氏菌顯色培養(yǎng)基產(chǎn)地來自法國科馬嘉公司，那么則由鄭州的博騫生物技術(shù)研究所進(jìn)行分裝。對于沙門氏菌、大腸埃希氏菌以及志賀氏族進(jìn)行診斷的血清選購來自蘭州生物制品研究所。上面所使用的試劑都是在有效期內(nèi)[2]。

　　所用儀器和設(shè)備生物安全柜、顯微鏡、電熱恒溫培養(yǎng)箱、電子天平、高壓滅菌鍋。

　　實驗方法在實驗過程中初了所使用的顯微鏡和培養(yǎng)基配置之外，具體的實驗操作應(yīng)該在100— 1000 級具有生物特性的潔凈室內(nèi)。

　　第一，菌株檢測方法按照 GB/T4789— 2008 中相應(yīng)操作規(guī)程進(jìn)行；第二，菌株的篩選和鑒定經(jīng)過初篩在 CAS、SS、HE 分離平板上挑取相應(yīng)的疑似菌落接種雙糖鑒別生化管，初篩符合者，血清玻片凝集試驗和鏡檢，系統(tǒng)生化鑒別實驗。

　　討論

　　沙門氏菌成為引起人們食物中毒或者是導(dǎo)致腸道腹瀉的病原菌之一，成為重要的腸道病原菌。其中通過添加了特異的顯色底物的方式就能更快檢測出樣品中所含的沙門氏菌，從而快速地提高檢測的準(zhǔn)確率。當(dāng)前沙門氏菌檢測的方法依舊沿用之前的生化方法，其中包括了亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液增菌、分離培養(yǎng)、血清型鑒定生化鑒定等多個步驟，這個過程一般需要一個星期，操作起來比較繁瑣，并且不能很好地保證和滿足微生物檢測要求，所以，要快速檢查沙門氏菌顯色培養(yǎng)基這個是非常重要的環(huán)節(jié)。通過顯色培養(yǎng)基進(jìn)行微生物鑒定的方法，成為這些年配置新型快速檢測關(guān)鍵技術(shù)，就能直接根據(jù)沙門氏菌的實驗菌落的顏色，從中獲取相關(guān)的變化進(jìn)行初步的鑒定，從而能有效減少其他的干擾因素。在腸道相關(guān)的診斷部門來看，其對食物的采集并不是很規(guī)范，對于培養(yǎng)基而言有其局限性等眾因素的影響，從而使以往的檢測分離方法的靈敏度降低。由于顯色培養(yǎng)基具有高靈敏度、高效率等優(yōu)點，作為一種新型的微生物檢測技術(shù)，這種方式得到人們普遍的認(rèn)可。對于沙門氏菌在 CAS 顯色平板上，其所呈現(xiàn)出的菌落顏色非常容易辨別出來是紫色，然而不是沙門氏菌則會表現(xiàn)為藍(lán)色或者是灰白色，則充分說明 CAS 平板的沙門氏菌檢出率都普遍高于 SS以及HE 平板，從而有效簡化相關(guān)的程序，節(jié)約時間，由此可見，在進(jìn)行顯色培養(yǎng)基時，是屬于有價值的分離鑒定平板，可以作為以往平板的補(bǔ)充[3]。

　　結(jié)語

　　總而言之，對于CAS 平板而言其具有易鑒別、選擇性好的特點，其最大的優(yōu)勢是對普通培養(yǎng)基的選擇，尤其在面對突發(fā)事件的處理過程，通過選擇CAS 平板的鑒定方式就能取得很好的結(jié)果。通過將顯色培養(yǎng)基與以往的檢測技術(shù)結(jié)合的方式能對食物性致病的菌落進(jìn)行檢測，能快速地獲取到結(jié)果，最終成為微生物快速檢測技術(shù)發(fā)展的重要方向。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1]陳博, 滕昆侖, 盧勉飛,等. 高特異性沙門菌顯色培養(yǎng)基性能評價[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2018, 28(18):2189-2192.

　　[2]劉亞鋒, 王則宇, 吳志洋,等. 一種新型B群鏈球菌顯色培養(yǎng)基在孕婦產(chǎn)前B群鏈球菌檢測中的應(yīng)用效果研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2020(8).

　　[3]程瀟, 劉娟娟, 賈貞,等. 2種培養(yǎng)基對乳粉中沙門氏菌的定量檢測比較[J]. 農(nóng)業(yè)災(zāi)害研究, 2020, 010(002):121-123.

　　范志龍

　　河池市食品藥品檢驗所

　　廣西河池 547000