白及清肺養(yǎng)胃口服液制備工藝的研究
□ 王勇 張志勇 貴州省食品藥品檢驗(yàn)所
□ 張炯怡 宋曉寧 李松 李靜鋒 貴州省食品檢驗(yàn)檢測院
摘 要:本研究處方中的白及和酸漿采用正交設(shè)計實(shí)驗(yàn),以提取時間、溶劑倍量和提取次數(shù)作為考察因素,以白及中1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)收率、總多糖收率和總固體物為考察指標(biāo),篩選出白及口服液的最佳提取工藝參數(shù)。
關(guān)鍵詞:白及口服液 制備工藝 1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯
貴州省大宗栽培的藥材白及是蘭科白芨屬,為多年生草本植物,性苦、甘、澀、微寒,歸肺、肝、胃經(jīng),具有收斂止血、消腫生肌的功效,主要用于治療肺結(jié)核咳血、外傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚皸裂等?!侗静輩R言》論述,“白及斂氣,止血,消癰之要藥也。此藥極粘膩,性極收澀,封填破損,癰腫可消,潰敗可托,死肌可去,膿血可潔,有托舊生新之妙用也。”由此可見,白及中的膠黏性成分(白及多糖)不僅有助于止血消癰,還具有封填破損、托舊生新的組織修復(fù)功能?,F(xiàn)代臨床研究證明,白及用于消化道潰瘍和出血的療效顯著;其中,消化道大出血等一般可在6~18h止血。貴州省擁有大規(guī)模白及種植基地,其中,育苗種植中的從種源圃、組培育苗、大田煉苗,以及馴化苗栽培技術(shù)均為貴陽藥用植物園自主研發(fā),且在行業(yè)生產(chǎn)中處于領(lǐng)先水平。目前,種植基地主要以藥材和育苗的形式銷售白及,附加值較低。因此,如何有效提升白及的附加值,擴(kuò)大白及產(chǎn)業(yè)鏈的發(fā)展成為當(dāng)前亟需解決的問題。鑒于此,本課題組在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下,適時提出以貴州省栽培的白及、酸漿等為配方原料,研制開發(fā)有助于改善肺部和胃腸道疾病的純天然保健食品——白及清肺養(yǎng)胃口服液。
1 材料與方法
1.1 材料
白及、酸漿,均為市售;山梨酸鉀(食品級),湖北盛天恒創(chuàng)生物科技有限公司;甜蜜素(食品級),山東尊宏生物科技有限公司。
圖 1 工藝流程圖
1.2 制備方法
1.2.1 制法
以上兩味——取白及飲片150g、酸漿100g,加水浸泡2h,煎煮3次(每次12倍量水),每次1小時;濾過,合并濾液,濃縮至每1mL含生藥0.25g;加入山梨酸鉀、甜蜜素,攪拌溶解,混勻;制成1000mL,分裝,密封,滅菌,即得。
1.2.2 工藝流程圖(見圖1)
1.3 提取工藝研究
本方組方藥材為白及和酸漿果,通過對白及進(jìn)行化學(xué)成分研究,制備了1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯對照品,并以1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯和多糖作為考察指標(biāo),對提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。
1.3.1 含量測定方法
1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯含量測定:按照高效液相色譜法《中國藥典》(2015年版四部 通則0512)進(jìn)行測定。
多糖含量測定:按紫外-可見分光光度法《中國藥典》(2015年版四部 通則0401)進(jìn)行測定。
總固體測定:精確稱取提取液50g置于干燥恒重的蒸發(fā)皿中水浴濃縮,得到浸膏后轉(zhuǎn)移至干燥箱中,于60℃干燥3h,然后迅速稱定重量,即得。
1.3.2 水煎煮提取工藝研究
根據(jù)文獻(xiàn)資料及前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)是影響煎煮效果的主要因素,按每個因素3水平,采用L9(34)正交表(見表1)安排試驗(yàn)。水煮工藝采用正交試驗(yàn)進(jìn)行篩選,以白及中1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)收率、總多糖收率和總固體物為考察指標(biāo),對提取工藝進(jìn)行綜合評價。
圖 2 提取液中 militarine 含量測定系統(tǒng)適用性試驗(yàn) HPLC 圖
(注:1 為對照品 ,2 為供試品溶液 ,3 為缺白及陰性提取液。)
2 結(jié)果與分析
2.1 樣品制備
取白及30g、酸漿果20g,按正交實(shí)驗(yàn)條件(表1)進(jìn)行試驗(yàn),依法測定1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯、總多糖含量和總固體物,以3個指標(biāo)的轉(zhuǎn)移率為評價指標(biāo)進(jìn)行綜合評價,權(quán)重系數(shù)分別為0.4、0.4、0.2,結(jié)果見表2。
2.2試驗(yàn)結(jié)果分析
將實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS 22.0軟件進(jìn)行處理,結(jié)果見表3。
從表2中的結(jié)果直觀分析,各因素影響順序?yàn)镃>B>A;其中,煎煮次數(shù)對提取工藝的影響較大。表3方差分析結(jié)果表明,煎煮次數(shù)有顯著性意義(P<0.05),而加水量和煎煮時間均無顯著影響,故確定最佳工藝條件為A3B3C3。在A、B因素中,最佳工藝和次佳工藝的極差較小,故次佳工藝為A2B2C3。為進(jìn)一步證實(shí)該工藝的合理性,以最佳工藝A3B3C3和次佳工藝A2B2C3進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn),結(jié)果見表4。
從表4結(jié)果可見,乙工藝的militarine、多糖轉(zhuǎn)移率和總固體物均高于甲工藝,且乙工藝有明顯的低耗、省時特點(diǎn),故選擇乙工藝進(jìn)行生產(chǎn)——加白及30g、酸漿果20g,12倍量的水,煎煮3次,每次1小時。
2.3 水煎煮提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)
按處方比例取白及60g、酸漿果40g,加12倍量的水,浸泡2h,煎煮1h,濾過,收集濾液,依法測定其中1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)收率、總多糖收率和總固體物,結(jié)果見表5。
結(jié)果表明,1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯平均收率為69.29%,多糖平均收率為41.67%,總固體物為32.15g,說明水煎煮工藝穩(wěn)定可行。
2.4 制劑添加劑的確定
2.4.1 山梨酸鉀的用量
本品為保健品口服液,經(jīng)水煎煮而得,為保證口服液在一定時間內(nèi)品質(zhì)不變,且穩(wěn)定有效,是以需要加入一定量的防腐劑。經(jīng)試驗(yàn),加入0.1%的山梨酸鉀作防腐劑較為合適。
2.4.2 甜蜜素的用量
作為中藥水提物制備而成的口服液,該產(chǎn)品未添加矯味劑故比較苦澀,為提高口感需加入適量矯味劑。經(jīng)試驗(yàn),加入0.1%甜蜜素時,其甜味口感較為合適。
2.5 樣品的制備
方中兩味——白及切片、酸漿果剪為兩半,用12倍量的水浸泡2小時,煎煮3次,每次1小時,濾過,合并濾液,濃縮至生藥量0.25g/mL。然后,加入山梨酸鉀、甜蜜素,攪拌溶解,混勻,制成1000mL,分裝,密封,滅菌,即得。
2.6 日劑量、裝量、規(guī)格的確定
本方臨床日用量為7.5g生藥,每處方量藥材(250g)是臨床推薦日用量的33倍,制備1000mL,規(guī)格為10mL,每日用量為30mL,每1mL含生藥0.25g,每日生藥量為7.5g。
參考文獻(xiàn):
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:四部[S].2015年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:103.
基金項(xiàng)目:貴州省科技廳科技支撐項(xiàng)目(黔科合[2016]支撐2856)。
作者簡介:王勇(1985-),男,博士,副高,主要從事植物化學(xué)和藥物分析研究。
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