□ 王勇 張志勇 貴州省食品藥品檢驗(yàn)所

□ 張炯怡 宋曉寧 李松 李靜鋒 貴州省食品檢驗(yàn)檢測院

摘 要：本研究處方中的白及和酸漿采用正交設(shè)計實(shí)驗(yàn)，以提取時間、溶劑倍量和提取次數(shù)作為考察因素，以白及中1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)收率、總多糖收率和總固體物為考察指標(biāo)，篩選出白及口服液的最佳提取工藝參數(shù)。

關(guān)鍵詞：白及口服液 制備工藝 1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯

貴州省大宗栽培的藥材白及是蘭科白芨屬，為多年生草本植物，性苦、甘、澀、微寒，歸肺、肝、胃經(jīng)，具有收斂止血、消腫生肌的功效，主要用于治療肺結(jié)核咳血、外傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚皸裂等?！侗静輩R言》論述，“白及斂氣，止血，消癰之要藥也。此藥極粘膩，性極收澀，封填破損，癰腫可消，潰敗可托，死肌可去，膿血可潔，有托舊生新之妙用也。”由此可見，白及中的膠黏性成分(白及多糖)不僅有助于止血消癰，還具有封填破損、托舊生新的組織修復(fù)功能?，F(xiàn)代臨床研究證明，白及用于消化道潰瘍和出血的療效顯著;其中，消化道大出血等一般可在6~18h止血。貴州省擁有大規(guī)模白及種植基地，其中，育苗種植中的從種源圃、組培育苗、大田煉苗，以及馴化苗栽培技術(shù)均為貴陽藥用植物園自主研發(fā)，且在行業(yè)生產(chǎn)中處于領(lǐng)先水平。目前，種植基地主要以藥材和育苗的形式銷售白及，附加值較低。因此，如何有效提升白及的附加值，擴(kuò)大白及產(chǎn)業(yè)鏈的發(fā)展成為當(dāng)前亟需解決的問題。鑒于此，本課題組在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，適時提出以貴州省栽培的白及、酸漿等為配方原料，研制開發(fā)有助于改善肺部和胃腸道疾病的純天然保健食品——白及清肺養(yǎng)胃口服液。

1 材料與方法

1.1 材料

白及、酸漿，均為市售;山梨酸鉀(食品級)，湖北盛天恒創(chuàng)生物科技有限公司;甜蜜素(食品級)，山東尊宏生物科技有限公司。

圖 1 工藝流程圖

1.2 制備方法

1.2.1 制法

以上兩味——取白及飲片150g、酸漿100g，加水浸泡2h，煎煮3次(每次12倍量水)，每次1小時;濾過，合并濾液，濃縮至每1mL含生藥0.25g;加入山梨酸鉀、甜蜜素，攪拌溶解，混勻;制成1000mL，分裝，密封，滅菌，即得。

1.2.2 工藝流程圖(見圖1)

1.3 提取工藝研究

本方組方藥材為白及和酸漿果，通過對白及進(jìn)行化學(xué)成分研究，制備了1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯對照品，并以1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯和多糖作為考察指標(biāo)，對提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。

1.3.1 含量測定方法

1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯含量測定：按照高效液相色譜法《中國藥典》(2015年版四部 通則0512)進(jìn)行測定。

多糖含量測定：按紫外-可見分光光度法《中國藥典》(2015年版四部 通則0401)進(jìn)行測定。

總固體測定：精確稱取提取液50g置于干燥恒重的蒸發(fā)皿中水浴濃縮，得到浸膏后轉(zhuǎn)移至干燥箱中，于60℃干燥3h，然后迅速稱定重量，即得。

1.3.2 水煎煮提取工藝研究

根據(jù)文獻(xiàn)資料及前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)是影響煎煮效果的主要因素，按每個因素3水平，采用L9(34)正交表(見表1)安排試驗(yàn)。水煮工藝采用正交試驗(yàn)進(jìn)行篩選，以白及中1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)收率、總多糖收率和總固體物為考察指標(biāo)，對提取工藝進(jìn)行綜合評價。

圖 2 提取液中 militarine 含量測定系統(tǒng)適用性試驗(yàn) HPLC 圖

(注：1 為對照品 ,2 為供試品溶液 ,3 為缺白及陰性提取液。)

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品制備

取白及30g、酸漿果20g，按正交實(shí)驗(yàn)條件(表1)進(jìn)行試驗(yàn)，依法測定1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯、總多糖含量和總固體物，以3個指標(biāo)的轉(zhuǎn)移率為評價指標(biāo)進(jìn)行綜合評價，權(quán)重系數(shù)分別為0.4、0.4、0.2，結(jié)果見表2。

2.2試驗(yàn)結(jié)果分析

將實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS 22.0軟件進(jìn)行處理，結(jié)果見表3。

從表2中的結(jié)果直觀分析，各因素影響順序?yàn)镃>B>A;其中，煎煮次數(shù)對提取工藝的影響較大。表3方差分析結(jié)果表明，煎煮次數(shù)有顯著性意義(P<0.05)，而加水量和煎煮時間均無顯著影響，故確定最佳工藝條件為A3B3C3。在A、B因素中，最佳工藝和次佳工藝的極差較小，故次佳工藝為A2B2C3。為進(jìn)一步證實(shí)該工藝的合理性，以最佳工藝A3B3C3和次佳工藝A2B2C3進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果見表4。

從表4結(jié)果可見，乙工藝的militarine、多糖轉(zhuǎn)移率和總固體物均高于甲工藝，且乙工藝有明顯的低耗、省時特點(diǎn)，故選擇乙工藝進(jìn)行生產(chǎn)——加白及30g、酸漿果20g，12倍量的水，煎煮3次，每次1小時。

2.3 水煎煮提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方比例取白及60g、酸漿果40g，加12倍量的水，浸泡2h，煎煮1h，濾過，收集濾液，依法測定其中1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(militarine)收率、總多糖收率和總固體物，結(jié)果見表5。

結(jié)果表明，1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯平均收率為69.29%，多糖平均收率為41.67%，總固體物為32.15g，說明水煎煮工藝穩(wěn)定可行。

2.4 制劑添加劑的確定

2.4.1 山梨酸鉀的用量

本品為保健品口服液，經(jīng)水煎煮而得，為保證口服液在一定時間內(nèi)品質(zhì)不變，且穩(wěn)定有效，是以需要加入一定量的防腐劑。經(jīng)試驗(yàn)，加入0.1%的山梨酸鉀作防腐劑較為合適。

2.4.2 甜蜜素的用量

作為中藥水提物制備而成的口服液，該產(chǎn)品未添加矯味劑故比較苦澀，為提高口感需加入適量矯味劑。經(jīng)試驗(yàn)，加入0.1%甜蜜素時，其甜味口感較為合適。

2.5 樣品的制備

方中兩味——白及切片、酸漿果剪為兩半，用12倍量的水浸泡2小時，煎煮3次，每次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至生藥量0.25g/mL。然后，加入山梨酸鉀、甜蜜素，攪拌溶解，混勻，制成1000mL，分裝，密封，滅菌，即得。

2.6 日劑量、裝量、規(guī)格的確定

本方臨床日用量為7.5g生藥，每處方量藥材(250g)是臨床推薦日用量的33倍，制備1000mL，規(guī)格為10mL，每日用量為30mL，每1mL含生藥0.25g，每日生藥量為7.5g。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：103.

基金項(xiàng)目：貴州省科技廳科技支撐項(xiàng)目(黔科合[2016]支撐2856)。

作者簡介：王勇(1985-)，男，博士，副高，主要從事植物化學(xué)和藥物分析研究。