板栗殼黃酮類成分的提取工藝研究

　　

　　張琳琳 1，呂華瑛'，王 琳 1，石 亮2，李克明3

　　

　　（1.山東中醫(yī)藥高等?？茖W校，山東煙臺 264199;2.山東藥品食品職業(yè)學院，山東威海 264210;

　　

　　3.山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟南 250014）

  基金項目∶山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計劃項目（2015-218）。 

　　

　　摘要∶為了優(yōu)化板栗殼中的黃酮類成分的提取工藝。分別采用不同溶劑、不同提取方式浸提板栗殼中的黃酮成分，并選取提取次數(shù)、加醇量（料液比）、提取時間、醇濃度作為考察因素，設計正交實驗對提取工藝進行優(yōu)化，以蘆丁為標準品，硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法，用可見-紫外分光光度計檢測提取物中總黃酮的含量，比較總黃酮提取物的收得率，優(yōu)選最佳提取工藝。結果表明，當選用60乙醇回流提取，提取2次，加醇量為10倍量，提取時間1.5h時板栗殼總黃酮提取率最高，平均提取率為19. 36%.

　　

　　關鍵詞∶板栗殼;黃酮;提取工藝

　　

　　板栗殼為殼斗科植物板栗（Castanea mollissima Bl.）的干 燥外果皮，除青海、新疆以外，在遼寧以南各?。ㄊ?、區(qū)）均 有栽培，作為中藥收載于《中華人民共和國藥典四部》（2015 年版）中[1],其藥性甘、澀、平，具有降逆化痰、清熱散結、 止血之功效，常用于治療反胃、消渴、咳痰、療痂、鈕血、 便血及腮腺炎等。

　　

　　板栗殼為板栗的帶刺毛殼，即板栗總苞。歷代"本草” 對其稱呼不同，《證類本草》中稱其為“栗毛殼”，《滇南 本草》中稱其為“子上殼刺”，《本草綱目》《中華本草》《中 藥大辭典》中均稱其為"栗毛球”，江西《草藥手冊》中稱其 為“板栗殼斗"，《中國藥典》中稱其為"板栗殼”，至今, 各名稱均有不同程度沿用。

　　

　　近年研究表明，板栗殼含有豐富的黃酮、多糖、酚類等 成分PF,文獻報道栗殼中含有豐富的天然棕色素，屬于黃 酮類，不僅可廣泛用于食品、日用化學品和藥品的著色劑， 現(xiàn)代藥理研究還顯示栗殼黃酮具有抗菌、抗氧化、自由基清 除等多方面作用故本課題系統(tǒng)研究并優(yōu)化板栗殼中黃 酮類成分的提取工藝，為其工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)提供依據(jù)。

　　

　　1儀器與試劑

　　

　　板栗，濟南市售。

　　

　　電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）；FA2004分析 天平（上海第二分析儀器廠）；TU-1810紫外分光光度計 （北京普析通用儀器有限公司）；KQE-400B型超聲清洗機 （濟南巴克超聲波科技有限公司）；KFS-C2電子天平（凱豐 集團）。

　　

　　無水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、蘆丁標準品。

　　

　　2方法與結果

　　

　　2.1黃酮成分測定

　　

　　釆用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法，以蘆丁為標準品繪制標準 曲線。準確吸取蘆丁標準溶液0.00 mL、0.25 mL、0.50 mL、 1.00 mL、1.50 tnL 和 2.00 mL（相當于蘆丁 0 ng、75 ng、 150昭、300昭、450 jig和600 gg）,加蒸餡水補足至2 mL,各加入30%乙醇溶液4 mL和5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL, 振搖后放置5 min,加入10%硝酸鋁溶液0.5 mL,搖勻后 放置6 min,加l.Omol/L氫氧化鈉溶液4 mL,搖勻，放置 15 min,于510 nm波長處測定吸光度，以零管為空白， 以吸光度S為縱坐標、蘆丁含量CCgg/mL）為橫坐標繪制 標準曲線，得到曲線方程為S11.67C-0.016 6,相關系數(shù) 居=0.999 1,蘆丁溶液的濃度在0.017?0.104 ng/mL范圍內(nèi) 與吸光度呈良好的線性關系。

　　

　　樣品測定。取2 mL樣品按照標準曲線繪制的操作步驟 進行檢測，同樣于510nm處進行吸光度的測定。

　　

　　2.2工藝流程

　　

　　將板栗殼洗凈后放于60 P烘箱中烘干，粉碎，過40目 篩，精密稱取栗殼粉樣品2 g,加入一定體積的溶劑，在相 應溫度水浴和浸提時間內(nèi)浸提，浸提液經(jīng)5 000 r/min離心 15 min,取上清液，定容至40 mL,放置于4 P冰箱中貯存 備用。

　　

　　2.3不同溶劑浸提產(chǎn)率

　　

　　分別釆用水、75%乙醇、正丁醇、乙酸乙酯為溶劑浸提 板栗殼中的黃酮成分，將提取成分純化后用超純水定容至 100 mL作為供試品試液，按照2.1的方法，測定吸光度， 根據(jù)標準曲線的回歸方程得出不同浸提液中黃酮的濃度，根 據(jù)公式（1）計算黃酮得率。

　　

　　式（1）中，歸為總黃酮產(chǎn)率，%, C為測定總黃酮的濃 度，mg/tnL, D為稀釋倍數(shù)，「為供試液的體積，mL, M 為板栗殼的質(zhì)量，go

　　

　　不同溶劑浸提板栗殼總黃酮產(chǎn)率見表1。從表1可以看 出，乙醇作為溶劑提取黃酮的產(chǎn)率最髙。

　　

　　2.4不同濃度乙醇提取黃酮產(chǎn)率

　　

　　精確稱取板栗殼粉樣品2.00 g共18份，置于100 mL具塞 錐形瓶中，分別加入25 mL 35%, 45%、55%、65%、75%和85%的乙醇溶液，每個處理重復3次。各組樣品均在室溫下浸 泡24h,之后減壓、抽濾，濾液瞄于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干, 溫度控制在60 °C以下。將蒸干的樣品稱重，干浸膏用30%乙 醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，并用30%乙醇定容至 刻度，搖勻后測定，按公式(1)計算黃酮產(chǎn)率。實驗結果見表2, 從表2可以看出，55%乙醇提取的黃酮產(chǎn)率最高。

　　

　　2.5不同提取方法提取黃酮產(chǎn)率

　　

　　(1)回流提取法。精確稱取板栗殼粉樣品2.00 g,置于 250 mL平底燒瓶中，加入25.0 mL的55%乙醇溶液，浸泡 20 min后加熱回流提取30 min,放冷，減壓抽濾，濾液放 置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸干，溫度控制在60。(2以下，干浸 膏用30%乙醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用30% 乙醇定容至刻度，搖勻，測定黃酮產(chǎn)率。平行測定4份，計 算平均產(chǎn)率。

　　

　　(2)超聲提取法。精確稱取板栗殼粉樣品2.00g,置 于100 mL具塞錐形瓶中，加入25.0 mL 55%的乙醇，浸泡 20 min后在超聲波清洗儀上室溫超聲30 min,超聲完畢后減 壓抽濾，濾液放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸干，溫度控制在 60 °C以下，向干浸膏中加入適量30%乙醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至 25 mL量瓶中，用30%乙醇定容至刻度，搖勻，測定黃酮產(chǎn)率。 平行測定4份，計算平均產(chǎn)率。

　　

　　(3)微波輔助提取法。精確稱取板栗殼粉樣品2.00 g, 置于250 mL具塞錐形瓶中，加入25.0 mL 55%的乙醇，浸 泡55 min(保證樣品與浸提溶劑接觸的總時間與其他方法一 致)，再用微波中火提取5 min(提取中每隔1?2 min停30 s), 放冷，減壓抽濾，濾液放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸干，溫 度控制在60 P以下，干浸膏用30%乙醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至 25 ml量瓶中，用30%乙醇定容至刻度，搖勻，測定黃酮產(chǎn) 率。平行測定4份，計算平均產(chǎn)率。

　　

　　實驗結果見表3,由表3可以看出，55%乙醇回流提取 的黃酮產(chǎn)率最高。

　　

　　2.6正交設計

　　

　　影響板栗殼總黃酮含量的因素主要有提取次數(shù)、加醇量 (倍量)、提取時間、醇濃度,故以這4個影響因素的3個水平,

　　

　　釆用L9 (3，)正交表設計進行實驗，考察板栗殼中總黃酮的 含量，結果見表4和表5。

　　

　　由表5的正交試驗數(shù)據(jù)結果可以看出，影響總黃酮含量 提取的4個因素按順序為D>B>C>A，即提取醇濃度 >加醇量〉提取時間〉提取次數(shù)。通過4因素3水平的考察, 得出最佳提取條件為AB3C3D3,即提取1次，加醇量為10 倍量，提取時間L5h,提取醇濃度60%時，所得板栗殼總 黃酮含量最高，為19.21%。通過方差分析表6可見，因素D、 B、C對試驗結果有顯著性影響，綜合分析實驗條件后選擇 A2B3C3D3為最佳提取條件，即釆用60%醇提取法，提取2次, 加醇量為10倍量，提取時間1.5 h。在以上工藝優(yōu)選條件下 重復實驗3次，平均提取率為19.36%。

　　

　　3討論

　　

　　板栗營養(yǎng)價值豐富，口感美味，受到廣大人民的喜愛， 在全國栽培廣泛，但板栗殼目前大多被當作廢棄物丟棄，造成了資源的浪費，主要原因是人們并未意識到板栗殼的價值 所在，對板栗殼的開發(fā)利用也未普及推廣。黨的十八大提出 了建設環(huán)境友好型、資源節(jié)約型社會的要求，加強板栗殼的 開發(fā)利用也正是響應國家號召的一大舉措。

　　

　　本文通過前期對板栗殼的藥理作用的文獻査閱，發(fā)現(xiàn)越 來越多的科研人員開始重視板栗殼的重大開發(fā)價值，對板栗 殼的研究也越來越多，通過研究人們發(fā)現(xiàn)了板栗殼具有的許 多藥理作用，包括抗菌抗炎、抗氧化、抗腫瘤、降血糖降血 脂和改善腦缺血等人們非常關注的一些作用，當然具體的臨 床應用還需要進一步的研究。

　　

　　在本實驗研究中通過對不同溶劑浸提板栗殼中的黃酮 成分，比較總黃酮提取物的收得率，優(yōu)選最佳提取溶劑為 55%乙醇提取；通過不同提取方式的研究確定了最佳提取方 式為55%乙醇回流提取；通過對影響實驗的4個因素3個 水平的正交試驗最終確定了最佳提取工藝為選用60%的乙 醇回流提取，加醇量為10倍量，提取次數(shù)為2次，提取時 間為1.5h,此時板栗殼總黃酮提取率最高，為19.36%。本

　　

　　陸俊,趙安琪，成策，等.核桃營養(yǎng)成分與生理活性及 開發(fā)研究為工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)及促進栗殼的臨床藥用提供了理論 依據(jù)。

　　

　　參考文獻

　　

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