楊毅青，王莉佳，馬增輝，王 祺

(山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西太原 030001)

摘 要：目的：建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛奶和雞蛋不同基質(zhì)中地塞米松殘留量的分析方法。方法：樣品經(jīng)乙酸-乙酸鈉和甲醇溶液提取，固相萃取柱凈化后，以甲醇-0.1%甲酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，采用電噴霧負(fù)離子模式電離，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式進(jìn)行采集，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果：地塞米松在0～44.191 4 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，平均回收率為70.53%～118.25%，為3.5%～7.0%。結(jié)論：該方法快捷、簡(jiǎn)便、回收率高，重現(xiàn)性好，可用于不同動(dòng)物源基質(zhì)中地塞米松的殘留量分析。

關(guān)鍵詞：地塞米松;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;動(dòng)物源性食品

Determination of Dexamethasone Residues in Animal Matrix by High-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

YANG Yiqing, WANG Lijia, MA Zenghui, WANG Qi

(Shanxi Institute for Food and Drug Control, Taiyuan 030001, China)

Abstract: Objective: To establish a method for the determination of dexamethasone residues in milk and eggs by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). Methods: The samples were extracted by acetic acid-sodium acetate and methanol solution, purified by spe column, and eluted by gradient elution with methanol-0.1% formic acid solution as mobile phase. The samples were ionized by electrospray ionization in negative ion mode, and collected by multiple reaction monitoring (MRM) mode, and quantified by internal standard method. Results: Dexamethasone had a good linear relationship in the range 0～44.191 4 ng/mL , the correlation coefficient () was 0.999 9. The recoveries were 70.53%～118.25%, and with the relative standard deviations () of 3.5%～7.0%. Conclusion: This method is rapid, simple, good recovery and good reproducibility, which is suitable for rapid determination of dexamethasone residues in different substrates of animal origin.

Keywords: dexamethasone; ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; animal derived food

地塞米松又名氟美松、氟甲強(qiáng)地松龍、德沙美松，是糖皮質(zhì)類激素。其衍生物有氫化可的松、潑尼松等，其藥理作用主要是抗炎、抗毒、抗過敏、抗風(fēng)濕，臨床使用較廣泛[1-2]。而在獸醫(yī)治療中被廣泛應(yīng)用于治療母畜代謝病，是畜禽飼養(yǎng)中普遍的藥物之一[3]。激素的頻繁使用會(huì)在畜禽體內(nèi)殘留，不僅給動(dòng)物源食品安全帶來隱患，而且對(duì)人們的健康及環(huán)境危害嚴(yán)重[4]。因此，世界各國(guó)嚴(yán)格禁止地塞米松作為生長(zhǎng)激素使用，且限制該藥物用于動(dòng)物源性食品中，并提出了嚴(yán)格的限量要求[5]。

目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)地塞米松殘留的檢測(cè)方法較多，主要采用酶聯(lián)免疫法、液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、超液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法等。本研究參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 21981—2008[6]，建立了一種快捷、簡(jiǎn)便、回收率好的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速檢測(cè)不同動(dòng)物源基質(zhì)中地塞米松殘留量的方法，為快速高效檢測(cè)動(dòng)物源性食品中地塞米松的殘留提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

1.1.1 試驗(yàn)樣品

新鮮牛奶、雞蛋，均購(gòu)置于某超市。

1.1.2 主要試劑

地塞米松標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量99.8%);氫化可的松-d3(阿爾塔科技有限公司，含量98.0%);甲醇、二氯甲烷、甲酸(美國(guó)Fisher公司，色譜純);乙酸、乙酸鈉(NaAC·4H2O)(國(guó)藥集團(tuán)，分析純);β-葡萄糖醛酸酶4.5 U/mL(德國(guó)默克公司);實(shí)驗(yàn)室一級(jí)超純水。ENVI-Carb固相萃取柱(500 mg/6 mL)和氨基固相萃取柱(500 mg/6 mL)(艾杰爾科技公司)。

1.1.3 儀器與設(shè)備

LCMS-8050液質(zhì)聯(lián)用儀(日本島津公司);UB-7pH計(jì)(丹佛儀器);V2S025渦旋混合器(德國(guó)ZKA);HC-3018離心機(jī)(安徽中科中佳科學(xué)儀器);氮吹濃縮儀(天津安特塞恩斯)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 液相條件

色譜柱：YMC C18(100 mm×2.1 mm，3 µm);流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液+甲醇溶液，梯度洗脫，見表1;流速：0.2 mL/min;柱溫：40 ℃;進(jìn)樣量：10 µL。

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子化模式：ESI-;質(zhì)譜掃描模式：多反應(yīng)檢測(cè)(MRM);電噴霧電壓：-3 000 V;離子源溫度：300 ℃;加熱氣流量：10 L/min;干燥氣流量：10 L/min;輔助氣壓力：60 psi;其他質(zhì)譜參數(shù)見表2。

1.2.3 提取與凈化

稱取均質(zhì)試樣5 g，置于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)工作液100 µL和10 mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，渦旋混勻，再加入β-葡萄糖醛酸酶100 µL，于(37±1)℃振蕩酶解12 h。取出冷卻至室溫，加入25 mL甲醇超聲提取30 min，0～4 ℃下，10 000 r/min離心10 min。將上清液轉(zhuǎn)入潔凈燒杯，加水100 mL，混勻后待凈化。依次用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液，6 mL甲醇，6 mL水活化ENVI-Carb固相萃取柱。提取液以2～3 mL/min的速度上樣于活化過的ENVI-Carb固相萃取柱。將小柱減壓抽干。用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液活化氨基固相萃取住。將活化好的氨基柱串聯(lián)在ENVI-Carb固相萃取柱下方。用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液洗脫并收集洗脫液，取下ENVI-Carb柱，再用2 mL二氯甲烷-甲醇溶液洗氨基柱，洗脫液在微弱的氮?dú)饬飨麓蹈?，? mL甲醇-水溶液溶解殘?jiān)﹥x器測(cè)定。用空白樣品，不加入內(nèi)標(biāo)，按上述步驟制備空白樣品提取液。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

(1)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。地塞米松標(biāo)準(zhǔn)品稱量前于105 ℃干燥箱干燥至恒重，經(jīng)折算相當(dāng)于11.0479 mg地塞米松的標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，得濃度為110.479 0 µg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。此儲(chǔ)備液可在-18 ℃以下避光存放12個(gè)月。

(2)內(nèi)標(biāo)工作液。取適量氫化可的松-d3內(nèi)標(biāo)溶液，配制出濃度為100 ng/mL的內(nèi)標(biāo)工作液。

(3)標(biāo)準(zhǔn)工作中間液。取適量地塞米松標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配制成濃度為1.1047 9 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作中間液。

(4)標(biāo)準(zhǔn)工作液。取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配制得濃度為110.479 0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2.5 系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制

分別取標(biāo)準(zhǔn)工作中間液0 mL、0.015 mL、0.020 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL和0.400 mL，用甲醇定容至10 mL，配制成系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作液中含內(nèi)標(biāo)濃度為10 ng/mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系及定量限

以地塞米松的定量離子峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)(y)，相應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出該樣品在0～44.191 4 ng/mL濃度范圍內(nèi)的線性方程為=0.204 1-0.027 6，相關(guān)系數(shù)=0.999 9，線性良好。取空白樣品按照方法定量限(濃度為0.4 µg/kg)水平進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，制備好的試樣溶液上機(jī)測(cè)定，信噪比大于10，滿足檢測(cè)要求。

2.2 回收率和重復(fù)性

取空白樣品，添加不同濃度的地塞米松標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，其余操作同上述供試品溶液制備，每個(gè)濃度平行測(cè)定6次，計(jì)算加標(biāo)回收率和重復(fù)性，結(jié)果見表3。(牛奶和雞蛋的方法定量限為0.4 µg/kg;最高殘留限量分別為0.3 µg/kg和不得檢出)。

3 結(jié)論

本研究通過對(duì)不同基質(zhì)中地塞米松殘留量進(jìn)行質(zhì)譜分析，建立了超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法，能同時(shí)快速檢測(cè)出牛奶和雞蛋不同基質(zhì)中添加的地塞米松殘留量，并從線性關(guān)系、重復(fù)性、回收率、精密度等方面對(duì)方法進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，該方法測(cè)定動(dòng)物源食品中的地塞米松殘留量，方法穩(wěn)定，數(shù)據(jù)可靠，為研究動(dòng)物源食品地塞米松殘留量的檢測(cè)提供了一定的參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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[3]王永娟,朱善元,劉博,等.地塞米松促進(jìn)豬繁殖與呼吸綜合征病毒致病性[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,44(7):293-295.

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