《食品安全導(dǎo)刊》刊號:CN11-5478/R 國際:ISSN1674-0270

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如何實現(xiàn)快速檢測及有效控制沙門氏菌

2015-03-31 11:08:57 來源: 食品安全導(dǎo)刊

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  □ 劉磊 陶文靖 北京良潤生物科技有限公司

  食源性疾病的治病因子主要有細(xì)菌、生物毒素、病毒、化學(xué)物質(zhì)、寄生蟲等5類,致病菌及其毒素,如沙門氏菌、單增李斯特菌、大腸桿菌O157、金黃色葡萄球菌等,在食源性疾病中,由致病菌引起的食物中毒是食品安全的主要問題,這些致病菌主要導(dǎo)致腸道疾病,嚴(yán)重的造成肝臟、大腦、腎臟等器官的損害,甚至死亡。本文主要介紹了沙門氏菌快速檢測系統(tǒng)及有效控制的方案。

  沙門氏菌快速檢測系統(tǒng)原理

  傳統(tǒng)的沙門氏菌檢測需要準(zhǔn)備多種培養(yǎng)液、培養(yǎng)基及試劑,在平均3~7天的檢測時間里,由通過培訓(xùn)的實驗員多次轉(zhuǎn)接增菌及生化鑒定才能完成沙門氏菌的初步判斷。

  Micro Fast®沙門氏菌快速檢測系統(tǒng)由沙門氏菌快速增菌培養(yǎng)基和金標(biāo)檢測卡組成,可實現(xiàn)樣品中沙門氏菌最短24小時檢測。在沙門氏菌增菌的過程中運用的技術(shù)主要是抑制競爭菌的生長,從而達(dá)到沙門氏菌的快速增殖,在低菌及高菌環(huán)境都能快速有效的實現(xiàn)沙門氏菌快速增菌??焖贆z測卡應(yīng)用“雙抗體夾心法”的原理,沙門氏菌和金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合及預(yù)包被于NC膜T線位置的特異性多克隆抗體結(jié)合,金顆粒的聚集而顯示明顯的紅線。通過肉眼直接觀察是否出現(xiàn)T線,判斷樣品中是否含有沙門氏菌。

  沙門氏菌增菌效果的對比實驗

  Micro Fast®沙門氏菌快速增菌培養(yǎng)基與其他2種培養(yǎng)基的修復(fù)能力、生長速度、特異性進(jìn)行對比實驗。(Micro Fast®培養(yǎng)基以下簡稱MF培養(yǎng)基、BPW為GB/T 4789.4-2010要求培養(yǎng)基、*FM為某國外品牌培養(yǎng)基)

  1 修復(fù)能力(比較MF、BPW和

  *FM培養(yǎng)基的復(fù)蘇效果)

  (1)熱損傷模型制備:經(jīng)過試驗,選取55℃,加熱15min的方法建立熱損傷模型。

  (2)冷損傷模型制備:選取-20℃冷凍,然后解凍建立冷損傷模型。

  (3)試驗方法:分別對冷損傷組和熱損傷組進(jìn)行檢測。相同濃度的沙門氏菌分別用上述方法進(jìn)行建模,將建模后的沙門氏菌,分別加入到96孔板中,并用不同的培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng),分別培養(yǎng)8h,24h,然后接種于選擇性培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)24h,最后用顯色平板進(jìn)行確認(rèn)。

  (4)結(jié)果分析:

  實驗結(jié)果(圖1、2)表明MF培養(yǎng)基對熱損傷和冷損傷菌的修復(fù)效果均優(yōu)于BPW和*FM培養(yǎng)基。優(yōu)秀的修復(fù)效果保證了后續(xù)的檢出。

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  2 擴增速度

  (1)實驗方法:分別選取6株不同的沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株(菌株編號分別為:CMCC50335、CMCC50115、CMCC50071、CMCC50093、ATCC14028、CICC21480),重新活化培養(yǎng),接種后,分別在三種不同的培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),分別于0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h取適量增菌液于600nm處測定OD值,并取平均值,繪制生長曲線。

  (2)結(jié)果及分析:實驗(見圖3)表明,沙門氏菌在MF培養(yǎng)基的生長速度均優(yōu)于BPW和*FM培養(yǎng)基,進(jìn)口*FM培養(yǎng)基優(yōu)于BPW,從圖上我們可以看出沙門氏菌用MF培養(yǎng)基進(jìn)行增菌達(dá)到相同OD時,從14小時,縮短到9小時內(nèi)。MF培養(yǎng)基對沙門氏菌增菌速度的增加,在后續(xù)檢測方法靈敏度一定的情況下,保證了整個系統(tǒng)對該菌的檢出時間能夠明顯的縮短。這也為后續(xù)檢測試驗的時間安排提供了更好的靈活性。

  3 特異性實驗

  (1)實驗方法:將干擾菌株接種于不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)18小時,觀察培養(yǎng)管的渾濁程度,并對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計。

  (2)結(jié)果分析:實驗說明(見表1),三種培養(yǎng)基均能抑制革蘭陽性菌。在對革蘭陰性菌的檢測中,MF對大腸桿菌的抑制效果最好,能夠避免樣品中的大腸桿菌對實驗結(jié)果的影響。更好的特異性,保證了沙門氏菌增菌后的產(chǎn)量,可以滿足更多的檢測方法的需求。

  沙門氏菌實際樣品檢測實驗

  1 實驗方法

  (1)將豬肉分割成14塊25g左右的肉塊,做以下處理(每塊肉單獨處理),4度放置過夜(見表2)。

  (2)MF快增法

  a.一步增菌(42度):

  取上述7個樣本分別轉(zhuǎn)接至225mL快速增菌培養(yǎng)基(MF)中的PM中:

  分別為:對照組、低菌組、高菌組,培養(yǎng)約6h。

  b.二步增菌(42度):

  取上述增菌液0.1mL,轉(zhuǎn)接至1mL SM中,42度培養(yǎng)約18h。

  c.轉(zhuǎn)接至顯色培養(yǎng)基(OXIOD沙門顯色平板)中。

  (3)國標(biāo)法

  a.一步增菌

  將另一半樣本分別轉(zhuǎn)接至225mL BPW中,36度培養(yǎng)8h。

  分別為:對照組、低菌組、高菌組,培養(yǎng)約24h。

  b.二步增菌:

  取上述增菌液1mL,轉(zhuǎn)接至10mL SC中,培養(yǎng)18h。

  c.轉(zhuǎn)接至顯色培養(yǎng)基(OXIOD沙門顯色平板)中。

  (4)點樣檢測

  取1mL增菌液到試管中沸水(100℃)加熱10min,冷卻至室溫,用滴管滴加3~4滴(約100μL)至金標(biāo)卡的樣品孔,反應(yīng)5~15min,判讀結(jié)果。

  2 實驗結(jié)果

  (1)增菌液劃線顯色培養(yǎng)基效果

  通過顯色培養(yǎng)基對比結(jié)果(見圖4、5、6),MF快速增菌培養(yǎng)基中幾乎無除沙門氏菌以外的雜菌長出,而GB增菌后,雜菌較多,所以MF培養(yǎng)基的選擇性要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國標(biāo)培養(yǎng)基。

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  (2)檢測卡檢測效果實驗

  整體結(jié)果分析:眾所周知,不同的檢測方法都具有一定的檢測靈敏度,當(dāng)檢樣中的目標(biāo)物的含量低于靈敏度時,則出現(xiàn)假陰性的結(jié)果(培養(yǎng)法:105CFU/25g,免疫方法105~107CFU/25g,PCR104~105CFU/25g)。通過3種不同培養(yǎng)基對沙門氏菌的復(fù)蘇效果的比較,MF培養(yǎng)基具有最好的復(fù)蘇效果、最快的增菌速度和優(yōu)良的特異性,這保證了MF培養(yǎng)基對沙門氏菌的穩(wěn)定、快速增殖,提高檢出率的同時,大幅度縮短檢測時間。綜上所述,MF沙門快速培養(yǎng)基為一種優(yōu)良的增菌培養(yǎng)基,是BPW的優(yōu)秀替代品。

  免疫方法,尤其是免疫層析方法是最快的鑒定方法,例如膠體金法在5~10min,即可以得到可靠的結(jié)果(靈敏度滿足的情況)。國外對該方法應(yīng)用較多,已經(jīng)有數(shù)個公司的產(chǎn)品通過AOAC和ISO的方法驗證,也有公司將免疫法整合到檢測系統(tǒng)內(nèi),實現(xiàn)自動化或半自動化,其中的代表即生物梅里埃的VIDAS。該類方法的缺點主要是容易出現(xiàn)漏檢和假陽性。但是一個優(yōu)良的培養(yǎng)基,可以有效的彌補免疫方法的不足,發(fā)揮其最大的長處。

  因此,在評價某種鑒定方法的同時,更應(yīng)該著眼于包括增菌方法在內(nèi)的檢測系統(tǒng)。

  企業(yè)如何控制沙門氏菌污染

  沙門氏菌廣泛存在于家禽、家畜及鼠類糞便里,極易污染到畜肉類、禽肉、蛋類、乳類及其制品。禽肉制品和雞蛋是沙門氏菌最容易污染的食品,根據(jù)各國的研究,零售生雞肉中沙門氏菌的污染率一般在10%~80%。因此,作為禽肉加工企業(yè)來說,控制沙門氏菌的污染,就顯得尤為重要。

  對于保障食品質(zhì)量與安全,最重要的莫過于標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)范,首先要做的就是嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程及生產(chǎn)規(guī)范;原料的監(jiān)測也是重要的環(huán)節(jié),畜禽在屠宰之前要經(jīng)過當(dāng)?shù)匦竽敛块T的檢驗和檢疫,確保把好這道關(guān);生產(chǎn)過程控制是重中之重,包括原料加工、包裝過程操作、車間環(huán)境、操作人員的衛(wèi)生情況等;最后,是否能夠?qū)⒚刻焐a(chǎn)的產(chǎn)品進(jìn)行抽樣化驗,做到抽檢合格才能出廠,也是至關(guān)重要的。

  要根除沙門氏菌對產(chǎn)品的污染,就必須增強企業(yè)生產(chǎn)的預(yù)警控制機制,企業(yè)要運用一套完整快速準(zhǔn)確又符合預(yù)算的檢測方法去保證產(chǎn)品免受污染,控制遭受污染的產(chǎn)品流向市場。

  小結(jié)

  良潤生物作為國內(nèi)微生物快速檢測方案供應(yīng)商中的領(lǐng)先者,專注于每一個環(huán)節(jié),確保食品安全,致力于微生物快速檢測技術(shù)的前沿。Micro Fast®致病菌快速檢測系統(tǒng)包括沙門氏菌、大腸桿菌O157、李斯特菌快速檢測系統(tǒng)。檢測系統(tǒng)通過優(yōu)化增菌培養(yǎng)基的增菌效果及檢測卡的檢測靈敏度及效率實現(xiàn)食源性致病菌檢測的快速、高效、精準(zhǔn)。MicroFast®致病菌快速檢測系統(tǒng)將致病菌檢測帶入“H”時代。

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