《食品安全導(dǎo)刊》刊號:CN11-5478/R 國際:ISSN1674-0270

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食品微生物檢驗方法研究

2016-09-26 16:10:26 來源: 食品安全導(dǎo)刊

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  近些年隨著各類食品安全問題相繼被報道,食品安全已經(jīng)成為社會關(guān)注熱點。目前危害食品安全最主要的原因依然是病原微生物的侵入。據(jù)WTO統(tǒng)計,全球每年約有15億人感染食源性疾病,其中70%的疾病是由病原微生物污染引起,因此,如何提高病原微生物檢驗靈敏度和準(zhǔn)確度成為食品安全工作人員研究的熱點問題。

  食品微生物是指個體微小、構(gòu)造簡單的低等生物。微生物的種類非常豐富,根據(jù)細(xì)胞有無可以分為細(xì)胞型和非細(xì)胞型,根據(jù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)可以分為真核微生物和原核微生物。各國對于食品微生物檢驗項目都很多,但是各國根據(jù)各國的實際情況,在微生物檢驗項目之間存在一定區(qū)別。我國食品微生物檢驗主要包括細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌等。

  免疫檢測技術(shù)ATP生物發(fā)光法是近些年應(yīng)用廣泛的一種免疫檢測技術(shù)。其主要是利用熒光素酶基于三磷酸腺苷(ATP)、熒光素及氧氣,在存在著鎂離子這種情況時,可把化學(xué)能向光能這種形式進(jìn)行轉(zhuǎn)化,三磷腺苷基于一定的濃度范圍,其濃度與所發(fā)光的強(qiáng)度可呈現(xiàn)為線性關(guān)系。該方法簡便、快速,不需要進(jìn)行微生物培養(yǎng)過程,直接將食品中的含菌量推算出來,在肉內(nèi)食品細(xì)菌檢測中應(yīng)用廣泛。分子生物學(xué)方法PCR技術(shù) PCR技術(shù)即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù),其原理是通過加熱雙鏈DNA,使其裂解為單鏈DNA,然后加入引物、DNA聚合酶以及模板,降低溫度,使引物與DNA的互補(bǔ)序列退化,再升高溫度,促使DNA合成。反復(fù)之后就能夠獲得大量的目的性片段,通過對片段進(jìn)行測序研究就能夠判斷微生物種類。食品微生物檢驗中,PCR方法能夠準(zhǔn)確的檢測啤酒中啤酒酵母、水體中大腸桿菌數(shù)量。核酸探針法 核酸探針法即分子雜交技術(shù),該項技術(shù)主要利用DNA分子的復(fù)性、變性以及堿基互補(bǔ)等特點,同時基于同位素、生物素等標(biāo)記確定探針的特異性。核酸是載有遺傳信息的生物大分子,核酸探針技術(shù)就是將核酸作為標(biāo)靶,核酸能夠與具有同源性序列的核酸單鏈互補(bǔ)為穩(wěn)定的DNA/DNA、DNA/RNA鏈,通過合成特定的核酸探針就能夠?qū)⑻禺惖幕驕y定出來。該項技術(shù)非常敏感,目前已經(jīng)運用到食品微生物檢驗。

  代謝學(xué)技術(shù),電阻抗法 電阻抗法近些年已經(jīng)運用到食品微生物檢驗中,其原理是微生物在培養(yǎng)繁殖過程中會分解培養(yǎng)基中的大分子物質(zhì)為小分子帶電活性物質(zhì),例如乳酸鹽、醋酸鹽,這些小分子帶電離子能夠增加培養(yǎng)基的導(dǎo)電性,改變培養(yǎng)基的阻抗,通過檢測培養(yǎng)基的阻抗變化就能夠判斷培養(yǎng)基微生物種類,該方法主要用于對金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、霉菌、酵母菌的檢測??焖倜赣|反應(yīng) 快速酶觸反應(yīng)是根據(jù)微生物在生長繁殖過程中會合成某種特異的酶,選用相應(yīng)的底物和指示劑就能夠判斷該培養(yǎng)基是否存在某類微生物,該法主要用于快速測定某類微生物是否存在,該方法能夠快速測定細(xì)菌總數(shù)、酵母菌、金黃色葡萄球菌、大腸菌群等。微量生化法 微量生化法主要通過商業(yè)試劑盒快速發(fā)展,其中API細(xì)菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)是較為著名的一種商業(yè)試劑盒,由法國生物-梅里埃集團(tuán)生產(chǎn)。其含有20個塑料小管,管內(nèi)加有反應(yīng)底物的干粉和反應(yīng)產(chǎn)物的顯色劑,能夠鑒定菌種的各種生理生化反應(yīng),目前該試劑盒已被國內(nèi)外各相關(guān)實驗室選用,能夠鑒定700多種細(xì)菌,反應(yīng)簡單、快速、可靠。微生物檢測儀 常用的微生物檢測儀包括流式細(xì)胞術(shù)和電阻電導(dǎo)檢測器。流式細(xì)胞術(shù)基本原理是對細(xì)胞懸液進(jìn)行定量分析,由于其檢測到的熒光強(qiáng)度與DNA片段大小成正比,因此能夠快速鑒定細(xì)胞懸液中微生物種類和數(shù)量。電阻電導(dǎo)檢測器主要是根據(jù)測定培養(yǎng)液中的電阻電導(dǎo)率來確定食品中微生物的種類和數(shù)量,其原理是根據(jù)微生物對周圍大分子物質(zhì)的分解。

  食品微生物檢驗關(guān)系到全社會甚至是全人類的生命安全,食品微生物檢驗人員應(yīng)該提高自身專業(yè)素質(zhì),在工作過程中盡心盡責(zé),確保工作準(zhǔn)確無誤。

  青島市疾病預(yù)防控制中心

  曲劍英 王麗娟 王慧 郭凱

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