關(guān)鍵詞：醬油;黃曲霉毒素B1;免疫親和柱;熒光檢測器;光化學(xué)衍生

　　試劑和溶液 除非另有規(guī)定，所用水為蒸餾水或去離子水;乙腈(色譜純);乙腈-水溶液(8+2)：取80ml乙腈加20ml水;氯化鈉(分析純)吐溫-20(分析純);黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液(3ug/ml),保存于4℃?zhèn)溆?黃曲霉毒素B1系列標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取適量的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液，用甲醇稀釋成系列的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

　　儀器和設(shè)備 高速均質(zhì)機(jī)(最高轉(zhuǎn)速≥10,000r/min)或搖床;黃曲霉毒素B1免疫親和柱;玻璃纖維濾紙;空氣壓力泵;0.22um微孔濾膜;高效液相色譜儀：具有365nm激發(fā)波長和460nm發(fā)射波長的熒光檢測器;UVE光化學(xué)柱后衍生器;色譜柱：C18柱(柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm，填料直徑5um)。1 提取:稱取5g±0.01g樣品加入1g氯化鈉與25ml提取液(80%乙腈-水溶液)渦旋5min混勻;然后高速均質(zhì)(≥10,000r/min)1min,或搖床(200r/min～300r/min)劇烈振蕩20min后再3500r/min離心10min;取10ml上清液加入40ml蒸餾水稀釋，在用微纖維濾紙過濾，并收集濾液作為上樣液。取25ml上樣液過免疫親和柱凈化。2 凈化:將免疫親和柱連接于20ml或50ml注射器下,并于氣控操作架相連接，將上述的提取液注入注射器中，調(diào)節(jié)氣泵開關(guān)，使液體以1～2滴/秒的速度流出，待液體排干后，用10ml去離子水洗滌2次，流速2～3滴/秒;對于顏色附著比較深的樣品，先用1%吐溫-20水溶液洗滌10ml,再用去離子水洗滌10ml, 流速2～3滴/秒;待離子水排完后，用氣泵將殘留的水抽干;再用2ml甲醇進(jìn)行洗脫，前1ml甲醇加入免疫親和柱后，蓋上小蓋保持5分鐘，然后以流速1滴/秒洗脫，待流完后再加入后1ml甲醇以流速1滴/秒洗脫，最后用氣泵抽干，合并2次洗脫液;洗脫液用0.22um微孔濾膜過濾后上機(jī)待測。

　　測定 1 高效液相色譜條件:流動(dòng)相：水/甲醇/乙腈(55/30/15,v/v)、流速：1.2ml/min、進(jìn)樣量：10～100ul、柱溫：36℃、色譜柱：C18柱(柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm，填料直徑5um)、熒光檢測器：具有365nm激發(fā)波長和460nm發(fā)射波長(使用柱后光化學(xué)衍生系統(tǒng))。2 定量:用進(jìn)樣器吸取樣品洗脫液和黃曲霉毒素B1系列標(biāo)準(zhǔn)工作液注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下測定標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品洗脫液的響應(yīng)值(峰高或峰面積)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用外標(biāo)法定量。3 空白試驗(yàn) ：除不稱取樣品外，均按上述測定條件和步驟進(jìn)行。4 結(jié)果計(jì)算: 樣中黃曲霉毒素B1的含量(X)以微克每千克表示，按下式計(jì)算：

　　式中：X—試樣中黃曲霉毒素B1的含量，單位微克每千克(ug/kg);C1—由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的樣液中黃曲霉毒素B1的含量，ng;C0—由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得試劑空白中黃曲霉毒素B1的含量，ng;V—樣液最終定容體積，mL;V1—樣液的進(jìn)樣體積，uL;f—稀釋倍數(shù);m—樣品質(zhì)量g

　　4.線性：B1含量在0.003ng～0.048ng范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性在0.9998以上。

　　線性數(shù)據(jù)表

　　級別 含量(ng) 響應(yīng) 相關(guān)線性

　　1 0.003 83811.5

　　2 0.006 159609.9

　　3 0.012 302316.4

　　4 0.024 608834.5

　　5 0.048 1184756.0

　　5.回收率：回收率在105～116之間

　　醬油及加標(biāo)測定數(shù)據(jù)(本底都為未檢出)

　　編號 加標(biāo)量(ng) 檢出值(ng) 加標(biāo)回收率 編號 加標(biāo)量(ng) 檢出值(ng) 加標(biāo)回收率

　　1 3.0 3.1515 105 4 12.0 12.9011 108

　　2 3.0 3.2044 107 5 12.0 13.5021 113

　　3 3.0 3.2911 110 6 12.0 13.9071 116

　　該方法線性好、回收率高，而且檢測過程簡便快捷，比起GB/T 5009.23，該方法省時(shí)省力檢測的準(zhǔn)確度更高，適用于檢測醬油中黃曲霉毒素B1的含量。

　　參考文獻(xiàn)：《食品中黃曲霉素B1、B2、G1、G2的測定》GB/T 5009.23-2006

　　安徽省淮南市食品藥品檢驗(yàn)中心 秦加松