《食品安全導(dǎo)刊》刊號:CN11-5478/R 國際:ISSN1674-0270

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HPLC法同時測定大黃中蘆薈大黃素、大黃酸含量

2017-01-16 16:29:50 來源: 食品安全導(dǎo)刊

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  采用HPLC法對大黃中含有的蘆薈大黃素與大黃酸含量進(jìn)行同時測定。方法:SymmetryC18(200mm×4.6mm, 5μm);甲醇(A)-01%磷酸水(B),流速:1mL/min;檢測波長:254nm;柱溫:30℃。結(jié)果:蘆薈大黃素在0.0198-0.495μg范圍內(nèi)r=0.9999,大黃酸在0.0505-1.2625μg范圍內(nèi)r=0.9999。蘆薈大黃素平均回收率為96.08%,RSD=1.79%,大黃酸平均回收率為96.08%,RSD=2.36%。結(jié)論:HPLC法可有效監(jiān)測大黃中蘆薈大黃素與大黃酸含量,有利于大黃質(zhì)量地控制。器材 Waters2695高效液相色譜儀;Sartorious十萬分之一電子天平;超聲清洗器等。試劑 大黃酸、蘆薈大黃素對照品, 實驗用水均為哇哈哈純凈水,甲醇為色譜純,磷酸為分析純。色譜條件 色譜柱:SymmetryC18(200mm×4.6mm, 5μm);流動相:甲醇(A)-0.1%磷酸水(B),行梯度洗脫:0-10min,5%-30%A;10-40min,30%-60%A;40-60min,60%A;60-70min,60%-100%A;70-80min,100%A。流速:1mL/min;檢測波長:254nm;柱溫:30℃。

  溶液的制備 對照品儲備液:精確稱取1.98mg蘆薈大黃素與2.02mg大黃酸對照品,分別置于2mL量瓶中,向其中加入甲醇定容至刻度,搖勻即對照品儲備液。對照品工作液:量取0.2mL蘆薈大黃素對照品儲備液,0.5mL大黃酸對照品儲備液,將其置于10mL量瓶中,充分混合。供試品溶液制備:精確稱取0.5g大黃粉末,將其放置于25mL量瓶中,向其中加入24mL甲醇,經(jīng)30min超聲提取,加入甲醇定刻度,搖勻,濾膜濾過,待測。線性關(guān)系考察:分別取1μL,5μL,10μL,15μL,20μL,25μL對照品溶液進(jìn)樣處理,峰面積積分。結(jié)果顯示,蘆薈大黃素回歸方程為:Y=2.75×106X-3.53×104,r=0.9999,線性范圍為0.0198-0.495;大黃酸回歸方程為:Y=4.34×106X-1.31×105,r=0.9999,線性范圍為0.0505-1.2625。精密度試驗:精密量取10μL供試品溶液連續(xù)進(jìn)行6次進(jìn)樣,對蘆薈大黃素與大黃酸峰面積積分值進(jìn)行計算,RSD分別為3.32%、0.66%,即表明儀器具有良好的精密度。穩(wěn)定性試驗:精密量取10μL供試品溶液,分別在制備后的0h,3h,6h,9h,12h,24h對其進(jìn)行測定,并計算蘆薈大黃素與大黃酸峰面積積分值,RSD分別為3.61%、1.48%,即表明在24h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。重復(fù)性試驗:精密稱取0.5g大黃粉末,根據(jù)“供試品溶液制備”方法完成6份溶液的制備,并進(jìn)樣分析,計算蘆薈大黃素與大黃酸質(zhì)量分?jǐn)?shù),RSD分別為4.05%、3.81%,即表明該方法具有良好地重復(fù)性。

  回收率試驗:精密稱取6份0.1g大黃粉末,將其放置于10mL量瓶中,分別向其中精密添加相應(yīng)體積的蘆薈大黃素與大黃酸對照品儲備液,向其中加入甲醇,使其能夠定容至9.5mL,根據(jù)“供試品溶液制備”方法制備20mL供試品溶液,測定加樣回收率以及RSD。結(jié)果顯示,蘆薈大黃素平均回收率為96.08%,RSD為1.79%,大黃酸平均回收率為96.08%,RSD為2.36%。樣品測定:根據(jù)上述方法,對3個不同批次的大黃樣品的蘆薈大黃素與大黃酸含量進(jìn)行測定,見表1。

  表1 3個批次的大黃樣品的蘆薈大黃素與大黃酸含量測定結(jié)果(mg.g-1)

  樣品編號 蘆薈大黃素 大黃酸

  1 0.565 0.445

  2 0.393 0.772

  3 2.921 4.262

  提取方法:將蘆薈大黃素與大黃酸提取率作為指標(biāo),對乙醇、甲醇兩種溶劑進(jìn)行考察,結(jié)果發(fā)現(xiàn),甲醇的提取效果更佳;對甲醇回流以及甲醇超聲兩種處理方法進(jìn)行了考察,結(jié)果顯示,兩種提取無明顯差異;分別進(jìn)行了30min、45min與60min甲醇超聲提取,結(jié)果顯示無差異。供試品溶液制備方法 在供試品溶液制備中,通過精密稱取0.5g樣品,并將其定容至25mL,但根據(jù)回收率試驗,應(yīng)當(dāng)稱取0.25g樣品,并加入含量相等的對照品溶液最終定容至25mL,由于對照品的購買成本較高,故將其減少至0.1g,并將定容調(diào)整為10mL,兩者實際上并無明顯差異。綜上所述,運(yùn)用HPLC法同時測定蘆薈大黃素與大黃酸含量,不僅具有較高準(zhǔn)確度、精密度,且穩(wěn)定性較好,各方面均與要求相符合 。

  馬青青 河南省疾病預(yù)防控制中心

  許文清 鐵道警察學(xué)院

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