食品微生物控制
2017-06-08 10:50:47 來(lái)源: 食品安全導(dǎo)刊
評(píng)論0條 我來(lái)說(shuō)兩句
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基的配制方法可概括為3種類型:不需要添加劑、需要添加劑、現(xiàn)配現(xiàn)用。需要添加劑的培養(yǎng)基分為直接添加和滅菌后添加,需要注意的是在添加過(guò)程中要做到無(wú)菌操作,使用通風(fēng)柜,佩戴口罩,并且不能使用過(guò)期的添加劑。
培養(yǎng)基在配制和使用過(guò)程中需要注意以下6點(diǎn),①稱量準(zhǔn)確:嚴(yán)格按照標(biāo)簽上的稱量數(shù)稱取,注意單雙料的變化。②溶解充分:加水時(shí)避免干粉掛壁粘底,避免燒糊。③分裝合理:分裝量不宜超過(guò)容器容積的2/3。④厚度合適:傾注平皿形成厚度至少為3mm(90mm)每皿18~20mL,培養(yǎng)時(shí)間超過(guò)48h或培養(yǎng)溫度高于40℃,則需要傾注更多的培養(yǎng)基(20~25mL)。⑤滅菌方式:根據(jù)培養(yǎng)基成分的不同,選擇適宜的滅菌方式。⑥使用規(guī)范:溶化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用,放置時(shí)間一般不應(yīng)超過(guò)4h,且未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。
標(biāo)準(zhǔn)菌株
標(biāo)準(zhǔn)菌株的性能確認(rèn)包括純度檢測(cè)和菌株的特征確認(rèn)。純度檢測(cè)要分別檢測(cè)細(xì)菌菌落的形態(tài)和鏡檢特征;菌株的特征確認(rèn)需要通過(guò)生化實(shí)驗(yàn)和診斷血清進(jìn)行鑒定。關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)菌株的傳代保藏,常見(jiàn)的菌種保藏方式有半固體、斜面、磁珠、甘油等,要注意每次傳代后都要進(jìn)行菌種的性能確認(rèn)。標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存原則要保證雙人雙鎖,避免污染。
對(duì)于是否有必要配備所有標(biāo)準(zhǔn)菌株的問(wèn)題,操作者應(yīng)結(jié)合自己實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的檢測(cè)項(xiàng)目,并按照GB 4789.28-2013附表D.9以及附錄E中所列的標(biāo)準(zhǔn)菌株酌情進(jìn)行配備。
樣品前處理
微生物的檢驗(yàn)首先是樣品前處理—均質(zhì)。固體和半固體樣品需要稱取25g樣品,盛置于225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min~
10000r/min均質(zhì)1min~2min,或放入盛有225mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min,制成1:10的樣品勻液。
對(duì)于均質(zhì)袋的選用:一般樣品只需要普通均質(zhì)袋;有細(xì)微顆粒的如面包等樣品建議選用側(cè)邊過(guò)濾袋;部分硬度較高的樣品建議選擇加強(qiáng)復(fù)合型均質(zhì)袋,避免均質(zhì)袋被刺破。
樣品前處理的稀釋要用微量移液器和無(wú)菌吸管來(lái)進(jìn)行,需要注意的是如果反復(fù)吹吸樣品稀釋液,容易形成有害氣溶膠,并增加污染機(jī)會(huì)。建議使用旋渦混合器,可以保證樣品稀釋液混合均勻,并減少污染。
常見(jiàn)問(wèn)題總結(jié)
在演講中,楊云斌還對(duì)于微生物檢測(cè)可能出現(xiàn)的常見(jiàn)問(wèn)題進(jìn)行了總結(jié),內(nèi)容分為人員、機(jī)器、物料、方法、環(huán)節(jié)5個(gè)方面,希望相關(guān)工作人員對(duì)此多加留意,避免此類問(wèn)題的發(fā)生。
人員:部分企業(yè)對(duì)人員的有效監(jiān)督不夠,應(yīng)安排對(duì)人的監(jiān)督,重點(diǎn)針對(duì)新上崗人員、易出問(wèn)題的檢驗(yàn)人員,監(jiān)督員應(yīng)考慮被監(jiān)督人是誰(shuí),應(yīng)該監(jiān)督的項(xiàng)目和方法;培訓(xùn)沒(méi)有按計(jì)劃進(jìn)行,培訓(xùn)結(jié)束后沒(méi)有進(jìn)行培訓(xùn)效果評(píng)估;壓力容器操作人員沒(méi)有壓力容器操作上崗證;微生物上崗操作考核未考專業(yè)知識(shí)及生物安全操作知識(shí)。
機(jī)器:設(shè)備檢定、校準(zhǔn)后未進(jìn)行結(jié)果確認(rèn),期間核查后未進(jìn)行評(píng)價(jià);設(shè)備檢定、校準(zhǔn)產(chǎn)生的修正因子未能正確應(yīng)用;可能受污染的設(shè)備未貼污染警示標(biāo)識(shí)或生物安全標(biāo)識(shí);天平使用記錄上稱量的小數(shù)點(diǎn)位與天平精度不一致,或與標(biāo)準(zhǔn)方法的要求稱量不一致;全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)的核查未做或不充分。
物料:滅菌物品與未滅菌物品放在一起;滅菌物品上無(wú)滅菌時(shí)間及有效標(biāo)識(shí),甚至無(wú)標(biāo)識(shí);培養(yǎng)基滅菌凝固后重復(fù)加熱溶解。
方法:標(biāo)準(zhǔn)更新不及時(shí),作廢標(biāo)準(zhǔn)未及時(shí)從工作場(chǎng)所撤出;用篩選法代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法進(jìn)行病原菌檢測(cè);方法更新前未對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證,或是方法內(nèi)容過(guò)于簡(jiǎn)單,未進(jìn)行能力確認(rèn)。
環(huán)節(jié):在超凈工作臺(tái)的風(fēng)機(jī)開(kāi)啟情況下進(jìn)行霉菌計(jì)數(shù),或是進(jìn)行病原微生物的操作;在生物安全柜內(nèi)使用酒精燈;未對(duì)紫外線燈進(jìn)行監(jiān)測(cè)及評(píng)價(jià);實(shí)驗(yàn)室廢棄物與生活垃圾混放。
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