《食品安全導(dǎo)刊》刊號:CN11-5478/R 國際:ISSN1674-0270

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PCX柱凈化-氣相色譜質(zhì)譜法測定牲畜瘦肉中的鹽酸克倫特羅

2017-11-23 12:30:19 來源: 食品安全導(dǎo)刊

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  鹽酸克倫特羅,又名瘦肉精,是一種對動物具有促進生長、減少脂肪含量的興奮劑類物質(zhì),曾廣泛應(yīng)用于生豬的飼養(yǎng)。由于鹽酸克倫特羅容易在動物組織內(nèi)殘留,當(dāng)人們食用含有一定量鹽酸克倫特羅的牲畜肉后,可能會引起中毒,所以我國已禁止將鹽酸克倫特羅作為生長促進劑使用。但因其具經(jīng)濟效益,故非法使用鹽酸克倫特羅的現(xiàn)象依然存在,因此建立快速高效的鹽酸克倫特羅檢測方法具有重要的意義。

  氣相色譜-質(zhì)譜檢測鹽酸克倫特羅的方法較多,如GB/T 5009.192-2003、NY/T 468-2006,我們在以往的實驗基礎(chǔ)上對前處理步驟進行了改變,在一定程度上減少了鹽酸克倫特羅的檢測時間。

  實驗部分

  材料與設(shè)備:三氯乙酸、氨水,分析純;甲醇、正己烷,色譜純;鹽酸克倫特羅標(biāo)準品;美托洛爾標(biāo)準品;N,O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMSCI);Agela Cleanert PCX固相萃取柱60mg/3mL;安捷倫氣相色譜-質(zhì)譜儀。

  氣相色譜條件:色譜柱RTX-5ms,30m x 0.25m x 0.25μm;程序升溫條件:初始溫度70℃,保留1min;18℃/min升溫至200℃,保留0.0min;5℃/min升溫至245℃,保留0.0min;25℃/min升溫至280℃,保留5.0min??傔\行時間:23.622min;載氣:氦氣,純度≥99.99%;進樣口溫度:220℃;進樣量:3μL;進樣方式:不分離進樣。檢測器:EI檢測器。檢測器溫度:230℃。全掃描模式:35-400amu。SIM模式:72、86、187、223、243、262amu。

  樣品處理 提?。悍Q取5~10g已粉碎的牲畜瘦肉于離心管中,加入15mL的5%三氯乙酸溶液,勻漿后超聲萃取20min,再以9000r/min離心3min,取清液于另一離心管。重復(fù)上述步驟一次,合并提取液。

  正己烷凈化:向上述提取液中加入10mL正己烷,渦旋震蕩后靜置分層,吸去上層正己烷相,若油脂較多,可重復(fù)一次。

  PCX凈化:依次加入3mL水、3mL甲醇活化PCX柱,棄去流出液;往PCX柱加入樣品提取液,棄去流出液;依次加入5mL甲醇、5mL水,棄去流出液;加入6mL的5%氨水甲醇溶液洗脫,收集洗脫液。

  衍生:在55℃加熱條件下氮吹洗脫液至干,加入內(nèi)標(biāo)美托洛爾,再氮吹至干。加入100μL甲苯和100μL (BSTFA)/(TMSCI)衍生試劑,渦旋2min后將樣品置于80℃烘箱中加熱衍生1h。待樣品冷卻后,加入800μL甲苯,渦旋2min后進樣測定。

  結(jié)果與討論

  鹽酸克倫特羅衍生后的氣相色譜圖如圖1所示,結(jié)果顯示,峰型良好,衍生效果滿足實驗要求。

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  圖1 鹽酸克倫特羅衍生后的氣相色譜圖

  提取方法的選擇:對比酶提取法、國標(biāo)NY/T 468-2006乙酸乙酯提取法、三氯乙酸酸性水溶液提取法,結(jié)果顯示,酶提取法操作繁瑣、耗時較長,一般需要在37℃下酶解16小時,而且試劑成本較高。乙酸乙酯提取法操作也比較繁瑣,需要旋蒸干乙酸乙酯后再進行凈化,影響實驗的回收率。采用三氯乙酸酸性水溶液提取法,鹽酸克倫特羅離子化后溶解在水中,并且結(jié)合PCX凈化,利用離子鍵作用力,能夠有效保留鹽酸克倫特羅。

  固相萃取柱的選擇:對比常用的固相萃取柱HLB和PCX柱,結(jié)果顯示,PCX柱回收率更高。主要原因可能是HLB主要采用范德華力保留待測物,而PCX有兩重作用力,π-π作用力和離子鍵作用力,能夠有效地保留鹽酸克倫特羅。結(jié)合氨水甲醇溶液洗脫,本實驗?zāi)軌蚝芎玫貎艋}酸克倫特羅,達到檢測要求。

  標(biāo)準曲線、檢出限、回收率與精密度:在10-500μg/L范圍內(nèi),鹽酸克倫特羅濃度與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,其線性回歸方程為:Y=8665.5X,相關(guān)系數(shù)為0.9990,檢出限為1μg/L。取一份經(jīng)檢測不含有鹽酸克倫特羅的樣品作為空白樣品,測得平均加標(biāo)回收率均大于75%,標(biāo)準偏差為2.6%~5.8%。

  實際樣品的應(yīng)用:本方法應(yīng)用于廣東省內(nèi)農(nóng)貿(mào)市場日常生活銷售的豬肉檢測,對其進行食品安全監(jiān)測與預(yù)警,假陽性檢出低,效果良好。

  崔昊 羅杰鴻 廣州京誠檢測技術(shù)有限公司

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