轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展
2018-04-25 21:16:11 來(lái)源: 食品安全導(dǎo)刊
評(píng)論0條 我來(lái)說(shuō)兩句
轉(zhuǎn)基因作物的檢測(cè)技術(shù)
轉(zhuǎn)基因作物不僅種類(lèi)眾多、數(shù)量龐大,而且深度處理會(huì)造成轉(zhuǎn)基因成分的部分或完全降解,極大地增加了檢測(cè)難度。為了更好地落實(shí)標(biāo)識(shí)管理制度,還需要依靠科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步不斷開(kāi)發(fā)新的檢測(cè)方法。目前針對(duì)轉(zhuǎn)基因作物的檢測(cè)技術(shù)主要分為兩類(lèi):一類(lèi)為蛋白質(zhì)水平上的檢測(cè)技術(shù),例如免疫印跡法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫試紙條法和蛋白質(zhì)芯片法等;另一類(lèi)為基于核酸水平上的檢測(cè)方法,常見(jiàn)的有核酸分子雜交法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法、基因芯片法以及等溫?cái)U(kuò)增法。
蛋白質(zhì)水平的檢測(cè)技術(shù)
轉(zhuǎn)基因作物所轉(zhuǎn)入的外源基因通過(guò)表達(dá)會(huì)產(chǎn)生外源蛋白,通過(guò)抗原抗體的免疫反應(yīng)對(duì)外源蛋白進(jìn)行分析即可實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米的檢測(cè)。
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
ELISA是蛋白質(zhì)檢測(cè)中應(yīng)用最廣的技術(shù)之一,但是使用ELISA檢測(cè)轉(zhuǎn)基因作物不僅需要良好的抗體,而且還需要穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,所以商業(yè)化的轉(zhuǎn)基因ELISA檢測(cè)產(chǎn)品并不多。ROMER LABS®作為世界知名的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)產(chǎn)品生產(chǎn)商及第三方實(shí)驗(yàn)室之一,其產(chǎn)品的抗體有著高靈敏、高特異性的特點(diǎn),且在試劑盒中包含了穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)品,確保了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
ROMER LABS®試劑盒的原理是以抗原-抗體的特異性免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),同時(shí)結(jié)合酶的高效催化反應(yīng)的一種高靈敏度蛋白檢測(cè)方法。目標(biāo)蛋白與固相載體上的抗體會(huì)形成抗原抗體復(fù)合物,再結(jié)合酶標(biāo)的抗體或抗抗體,就能夠利用酶的標(biāo)記作用實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的檢測(cè)。在反應(yīng)中加入酶的底物后,底物經(jīng)過(guò)酶的催化作用產(chǎn)生有色物質(zhì),根據(jù)顯色的深淺便可進(jìn)行定性或定量分析。這種方法通過(guò)酶催化作用,將抗原抗體反應(yīng)的結(jié)果放大,極大地提高了檢測(cè)方法的靈敏度。
免疫試紙條法(Lateral Flow Strip)
免疫試紙條法是基于免疫層析技術(shù)開(kāi)發(fā)出的一種蛋白檢測(cè)方法,其原理是將一對(duì)特異性抗體交聯(lián)在試紙條上,當(dāng)試紙條一端放入有抗原的溶液后,在毛細(xì)作用下,溶液會(huì)向著試紙條的另一端運(yùn)動(dòng),溶液中的抗原在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中會(huì)與標(biāo)記的抗體結(jié)合并隨層析液繼續(xù)向另一端運(yùn)動(dòng),當(dāng)遇到在膜上固定的另一抗體時(shí),就會(huì)形成標(biāo)記“抗體-抗原-抗體”的“三明治結(jié)構(gòu)”,形成肉眼可見(jiàn)的條帶。
ROMER LABS®根據(jù)不同的市場(chǎng)需求,針對(duì)常見(jiàn)的轉(zhuǎn)基因表達(dá)蛋白均設(shè)計(jì)了特異性檢測(cè)試紙條,并且推出了多合一檢測(cè)試紙條。ROMER LABS®試紙條不需要其它輔助儀器即可進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),可使轉(zhuǎn)基因檢測(cè)更加簡(jiǎn)單、快捷。
免疫印跡法(Western Blotting)
免疫印跡法是通過(guò)抗體與抗原在固相膜上的特異結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)外源基因表達(dá)蛋白質(zhì)的方法,這種蛋白質(zhì)檢測(cè)方法融合了蛋白質(zhì)凝膠電泳以及印跡和免疫測(cè)定技術(shù)。首先通過(guò)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離;然后把分離的蛋白轉(zhuǎn)到固相膜上;再讓蛋白與第一抗體、酶標(biāo)的第二抗體雜交結(jié)合,然后根據(jù)第二抗體上的標(biāo)記物的性質(zhì)進(jìn)行抗原的檢測(cè)。
蛋白質(zhì)芯片法
蛋白芯片技術(shù)的原理是對(duì)固相載體進(jìn)行特殊的化學(xué)處理,在其表面固定高密度排列的蛋白質(zhì)探針,根據(jù)蛋白質(zhì)分子的特性,捕獲能與之特異性結(jié)合的轉(zhuǎn)基因蛋白,然后用CCD相機(jī)或激光掃描系統(tǒng)獲取信息,最后用計(jì)算機(jī)進(jìn)行定性定量分析。
核酸水平的檢測(cè)技術(shù)
轉(zhuǎn)基因作物是通過(guò)插入外源基因片段來(lái)改變作物自身基因組從而獲得一些優(yōu)良性狀,新轉(zhuǎn)入的外源基因片段主要包括啟動(dòng)子、目的基因和終止子。因此,核酸水平的檢測(cè)主要是對(duì)以上3種基因片段進(jìn)行檢測(cè),常用的方法有Southern印記雜交法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法、基因芯片法等。
Southern印記雜交法
該法通常先把分離出的樣品DNA片段固定在硝化纖維或尼龍膜上,經(jīng)干烤或紫外線照射固定,然后使用帶有標(biāo)記的核酸探針與樣品DNA片段進(jìn)行雜交,用放射自顯影或酶反應(yīng)顯色來(lái)確定轉(zhuǎn)基因的DNA片段含量。這種方法只是將探針與樣品DNA進(jìn)行雜交,沒(méi)有樣品DNA的擴(kuò)增,所以與PCR檢測(cè)方法相比,檢測(cè)的靈敏度較低。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(PCR)
PCR擴(kuò)增的原理與天然DNA復(fù)制過(guò)程十分相似,以DNA半保留復(fù)制為基礎(chǔ),在聚合酶的作用下對(duì)目的DNA片段進(jìn)行體外快速擴(kuò)增,使微量的DNA片段在短時(shí)間內(nèi)得到指數(shù)級(jí)增長(zhǎng),對(duì)擴(kuò)增后的基因片段進(jìn)行凝膠電泳便可分析出是否含有轉(zhuǎn)基因成分。
目前在PCR的基礎(chǔ)上又發(fā)展出復(fù)合PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR、數(shù)字PCR等檢測(cè)方法,使轉(zhuǎn)基因檢測(cè)更加準(zhǔn)確。但PCR需要專(zhuān)業(yè)性操作,且需要昂貴的儀器。
基因芯片法
基因芯片檢測(cè)是基于DNA分子雜交的一種高通量檢測(cè)方法,首先將提取的待測(cè)樣品進(jìn)行熒光標(biāo)記,然后與基因芯片上已知序列的核酸探針進(jìn)行雜交,對(duì)雜交反應(yīng)后芯片上的熒光信號(hào)進(jìn)行分析,以此實(shí)現(xiàn)對(duì)標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子和目標(biāo)基因的檢測(cè)。
環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法(LAMP)
LAMP方法與PCR方法相似,針對(duì)目標(biāo)基因上的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4條引物,利用鏈置換型DNA聚合酶在恒溫條件下對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析即可判斷是否含有轉(zhuǎn)基因成分。
結(jié)語(yǔ)
近年來(lái),轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)快速發(fā)展,除了以上介紹的技術(shù)外,還出現(xiàn)了一些新的檢測(cè)技術(shù),比如生物傳感器分析技術(shù)、微陣列分析技術(shù)、色譜分析技術(shù)、近紅外線光譜分析技術(shù)以及納米檢測(cè)技術(shù)等。在檢測(cè)方面,各檢測(cè)技術(shù)均有其優(yōu)缺點(diǎn),但毫無(wú)疑問(wèn),準(zhǔn)確、快速將是檢測(cè)技術(shù)未來(lái)的發(fā)展方向。在實(shí)際檢測(cè)中,ROMER LABS®提供的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)ELISA試劑盒以及免疫試紙條兩種檢測(cè)方法,可根據(jù)待檢測(cè)樣品以及檢測(cè)環(huán)境的不同進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪x擇,同時(shí),選用多種方法聯(lián)合使用也是目前轉(zhuǎn)基因檢測(cè)的一個(gè)趨勢(shì)。
相關(guān)熱詞搜索:轉(zhuǎn)基因 研究進(jìn)展 檢測(cè)技術(shù)
相關(guān)閱讀
- (2014-07-28)非法轉(zhuǎn)基因稻種流向市場(chǎng),農(nóng)民偏愛(ài)“抗蟲(chóng)稻”
- (2014-07-29)農(nóng)業(yè)部回應(yīng)武漢非法種植轉(zhuǎn)基因水稻:嚴(yán)查絕不姑息
- (2014-08-06)檢測(cè)漏洞? 多數(shù)糧食無(wú)法檢測(cè)出轉(zhuǎn)基因
- (2014-09-22)轉(zhuǎn)基因食用油標(biāo)識(shí)不清 71名律師提訴訟
- (2014-10-27)使用“轉(zhuǎn)基因”食品要堅(jiān)持謹(jǐn)慎、公開(kāi)、透明原則
熱圖
- Mettler-Toledo 在中國(guó)國(guó)際漁業(yè)博覽會(huì)上展示創(chuàng)新的產(chǎn)品
- 食品異物問(wèn)題頻發(fā)?是時(shí)候了解X射線檢測(cè)了
- 開(kāi)拓科技創(chuàng)新,撬動(dòng)橡塑業(yè)高質(zhì)量發(fā)展
- 梅特勒托利多針對(duì)“難以發(fā)現(xiàn)”的污染物推出高品質(zhì)X射線檢
- 探索嬰幼兒輔食市場(chǎng)高質(zhì)量發(fā)展之路,為寶寶成長(zhǎng)保駕護(hù)航
- 《食品安全最佳實(shí)踐白皮書(shū)(2021-2022年)》四大主題發(fā)布
參與評(píng)論