羅丹明B是一種被懷疑致癌物質(zhì),又稱玫瑰紅B,或堿性玫瑰精,俗稱花粉紅,是一種具有鮮桃紅色的人工合成的染料。辣椒油中羅丹明B的檢測(cè)是日常檢測(cè)項(xiàng)目,一般采用液相串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)。本文優(yōu)化了已有方法,簡(jiǎn)潔方便地檢測(cè)辣椒油中的羅丹明B。
實(shí)驗(yàn)部分
儀器、試劑與材料ACQUITYUPLCI-Class超高效液相色譜儀、XevoTQ-Smicro電噴霧串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀;PCX柱子;乙腈,色譜純;正己烷,色譜純;實(shí)驗(yàn)用水為milli-Q高純水;羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液。
實(shí)驗(yàn)條件 液相色譜條件:WatersACQUITYUPLCBEHC18柱(50mmx2.1mm,1.7μm)色譜柱;柱溫40oC;進(jìn)樣量1μL;流速為0.3mL/min;流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液,B為乙腈。梯度洗脫程序?yàn)椋?.00~1.00min,85%~85%A;1.00~2.00min,85%~15%A;2.00~3.00min,15%~15%A;3.00~4.00min,15%~85%A;4.00~5.00min,85%~85%A。
質(zhì)譜條件:電噴霧離子源;正離子掃描;毛細(xì)管電壓0.5kV;離子源溫度150oC;去溶劑氣500oC;去溶劑氣流量(氮?dú)猓?00L/h;氣簾氣流量50L/h;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式檢測(cè);羅丹明B的離子監(jiān)測(cè)條件為下表所示。
樣品處理:取1.0g辣椒油,加入10ml含2%三氯乙酸的正己烷溶液,超聲萃取5min。依次用5ml甲醇,5ml水,5ml甲醇活化PCX柱子。10ml上述正己烷提取液直接上樣凈化,棄去濾液。5ml氨水甲醇溶液洗脫,收集洗脫液。洗脫液用氮?dú)獯抵两?,用初始流?dòng)相溶液重新溶解,定容至2ml。渦旋混勻后,LCMSMS測(cè)定。
結(jié)果與討論
樣品提取方法的優(yōu)化 本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了乙腈、正己烷、甲醇、二氯甲烷等萃取溶劑,結(jié)果表明,辣椒油易溶于正己烷,不易溶于乙腈等,所以采用正己烷溶液提取。羅丹明B在酸性提取液中呈離子狀態(tài),有利于在PCX柱子上的保留,所以添加三氯乙酸調(diào)節(jié)酸性。
質(zhì)譜分析條件的優(yōu)化 將一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液以注射式連續(xù)直接進(jìn)樣的方式進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜全掃描分析,得到羅丹明B的準(zhǔn)分子離子峰([M+H]+),然后選取準(zhǔn)分子離子峰進(jìn)行轟擊,通過(guò)優(yōu)化碰撞能量、質(zhì)譜分辨率等參數(shù),最大化地提高檢測(cè)的靈敏度。通過(guò)分析二級(jí)質(zhì)譜信息得出,羅丹明B的二級(jí)質(zhì)譜碎片主要包括m/z399.2,m/z355.2。根據(jù)歐盟的標(biāo)準(zhǔn),選取443.3/399.2,443.3/355.2作為監(jiān)測(cè)離子。
流動(dòng)相條件的優(yōu)化 本研究考察了甲醇+0.1%甲酸水溶液,乙腈+0.1%甲酸水溶液,甲醇+水溶液,乙腈+水溶液四種混合溶液體系。結(jié)果表明,含有0.1%甲酸的水溶液體系響應(yīng)值更好,原因是羅丹明B采用正離子模式測(cè)定,增加酸的濃度有利于產(chǎn)物的離子化。甲醇是一種親核試劑,我們發(fā)現(xiàn)它與三苯甲烷結(jié)構(gòu)化合物能夠發(fā)生親核反應(yīng),因此不采用甲醇作為流動(dòng)相。反應(yīng)式如圖所示。
線性范圍、檢出限、回收率與精密度 測(cè)定其標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果表明,在線性范圍5~100μg/L,線性關(guān)系良好,其相關(guān)系數(shù)r大于0.9995。檢出限一般以方法檢出限作為其檢出限,按照10倍信噪比作為其方法檢出限,計(jì)算其檢出限為1ug/L。選用經(jīng)過(guò)測(cè)定不含有羅丹明B的辣椒油樣品,分成三組。三組樣品分別添加10ug/L、20ug/L、50ug/L低、中、高三個(gè)濃度,按照本方法進(jìn)行添加回收率和精密度(n=3)實(shí)驗(yàn),計(jì)算得到回收率為81%~107%,RSD為2.5~3.7%。
對(duì)比國(guó)標(biāo)SN/T2430-2010采用GPC凈化的方式,本方法處理簡(jiǎn)單,快捷,適合于大量樣品的處理,為日常生活食品安全的監(jiān)測(cè)與預(yù)警提供技術(shù)支持。
趙得娟 張曉芝 羅杰鴻 廣州京誠(chéng)檢測(cè)技術(shù)有限公司
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