固相微萃取與高效液相色譜聯(lián)用測(cè)定食品中的蘇丹紅
戴桂梅
關(guān) 鍵 詞:固相微萃取;高效液相色譜;蘇丹紅
蘇丹紅系列染料是非生物合成親脂性偶氮化合物,因蘇丹紅能引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟、膀胱細(xì)胞癌變,對(duì)人體健康有害并可能致癌,1995年歐盟國家已禁止其作為食用色素,我國在《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中也禁止將蘇丹紅作為食品添加劑使用。蘇丹紅事件敲響了食品安全的警鐘,在檢測(cè)方面,研究發(fā)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)蘇丹紅方法,開發(fā)成本低、操作簡(jiǎn)單、高效、快速、能重復(fù)應(yīng)用等優(yōu)點(diǎn)的檢測(cè)設(shè)備是今后研發(fā)的方向之一。
目前測(cè)定蘇丹紅的前處理方法有固相萃取法、凝膠柱凈化法、旋蒸濃縮層析法,固相微萃取法。相比較,固相微萃取法節(jié)省溶劑、高效、易與分析儀器聯(lián)用。
本文采用固相微萃取法進(jìn)行樣品前處理建立與高效液相色譜聯(lián)用快速檢測(cè)食品中蘇丹紅,簡(jiǎn)化樣品的前處理,降低成本,縮短儀器檢測(cè)時(shí)間。
一、實(shí)驗(yàn)部分
1.主要儀器。Thermo U3000高效液相色譜儀;Agilent C18色譜柱(250mm,4.6mm,5μm);75μmCarboxen/PDMS固相微萃取頭;分析天平:0.1mg;磁力攪拌器
2.試劑。蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)溶液;乙腈;丙酮;甲酸;正己烷
3.色譜分析條件。色譜柱:Thermo C18
流動(dòng)相:溶劑A 0.1%甲酸的水溶液:乙腈=85:15
溶劑B 0.1%甲酸的乙腈:丙酮=80:20
梯度洗脫:流速:1.0mL/min;柱溫:30℃波長;蘇丹紅Ⅰ478nm;蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ520nm,于蘇丹紅Ⅰ出峰后切換,進(jìn)樣量10μL。梯度條件見表1。
4.標(biāo)準(zhǔn)曲線。準(zhǔn)確吸取蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,配制系列濃度分別為0、0.32、0.64、1.28、2.56、5.12μg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,根據(jù)各組分的響應(yīng)峰面積與相應(yīng)的濃度進(jìn)行線性回歸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5.樣品測(cè)定。加標(biāo)樣品溶液置于一個(gè)3 mL萃取瓶中,將75μm Carboxen/PDMS 固相微萃取頭插入萃取瓶中,讓涂層全部浸入萃取溶液,置于磁力攪拌器上,在一定的攪拌速度下萃取20min。將75μm Carboxen/PDMS 固相微萃取頭從樣品瓶中取出后,用正己烷溶液解吸15 min,除去75μm Carboxen/PDMS 固相微萃取頭表面殘留萃取溶液。經(jīng)濾膜過濾后待測(cè)。
二、結(jié)果與討論
1.線性關(guān)系與檢出限。蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)曲線在(0.32-5.12μg/mL)線性范圍內(nèi),以峰面積y為縱坐標(biāo),濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性方程,回歸方程、相關(guān)系數(shù)R2 =0.9993,濃度與峰面積之間呈現(xiàn)良好線性。
以S\N=3時(shí)對(duì)應(yīng)的濃度作為檢出限,蘇丹紅四種化合物的檢出限均在10μg/L以下。
2.實(shí)際樣品及加標(biāo)回收測(cè)定。采用本方法,對(duì)市面出售辣椒粉進(jìn)行測(cè)定,檢測(cè)結(jié)果為未檢出。故取辣椒粉進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。稱取樣品2g(精確到0.0001g),在樣品中添加蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)溶液即樣品加標(biāo)量為2.56μg/mL。按上述前處理方法,進(jìn)行三水平測(cè)定。精密度和回收率見表2。
表2 加標(biāo)樣品回收率與精密度
由表可見三種分析物加標(biāo)回收率在96%-99%之間,具有較高的回收率,相對(duì)偏差分別為0.62,0.82,0.43,0.60,精密度較好。
三、結(jié)論
本方法采用固相微萃取進(jìn)行樣品前處理,簡(jiǎn)化了樣品前處理的步驟,節(jié)省時(shí)間,同時(shí)該樣品前處理方法具有線性關(guān)系良好、回收率高、精密度好等優(yōu)點(diǎn),能快速、高效、準(zhǔn)確地測(cè)定食品中的蘇丹紅。
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作者單位:廣西玉林市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所
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